[发明专利]一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法

权利要求书

1.一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)选取生长健康的不同需冷量桃种质资源；

2)采样：在冬季大量落叶期前后15d，采集树冠中上部健壮一年生中果枝花芽5.0g，置于液氮中速冻，-80℃冰箱保存备用；

3)绘制脱落酸工作曲线：称取脱落酸标准品4.0mg，分别用甲醇定容于100.0mL容量瓶中，作为母液，浓度为0.04mg/mL，分别取2.0mL、2.5mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL母液置于10mL容量瓶，用甲醇稀释成不同浓度梯度的溶液，用0.22um有机过滤膜过滤，利用高效液相色谱仪测定不同浓度脱落酸峰面积，根据脱落酸峰面积与浓度绘制工作曲线；

4)脱落酸的提取：将步骤2)收集的新鲜花芽，液氮速冻后用冷冻干燥机干燥至恒重，充分研磨粉碎，准确称取100.0mg置于2.5mL离心管，加入提取液，甲醇:水:甲酸＝80:20:0.2，1.5mL，摇床中震荡提取40min，离心8min，14000r/min，4℃，离心后吸取上层液置于新的5mL离心管，同样提取方法提取2次后合并提取液，氮吹仪挥干溶剂，加入1mL 50％甲醇水溶液复溶，用0.22um有机过滤膜过滤后上机分析；

5)脱落酸含量测定：采用高效液相色谱仪测定花芽中脱落酸含量，条件：

色谱柱：YMC-Pack ODS-AM，150×4.6mm，3μm；柱温：30.0℃；检测波长265nm；

流动相A：0.1％甲酸水溶液；流动相B：甲醇；流速：0.5mL/min；进样量10.0μL；

时间梯度：0.00-33.00min：40％B、33.01-34.00min：100％B、34.01-46.00min：100％B、46.01-47.00min：40％B、47.01-60.00min：40％B；

6)当未知需冷量桃种质资源干燥花芽中脱落酸含量小于13.50μg/g，鉴定为极低需冷量桃种质资源，需冷量300h。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，其特征在于：步骤1)所述的不同需冷量桃种质资源，选自热带王子、南山甜桃、Flordaglo、玛丽维拉、Sunraycer、早红2号、中油13号、双佛、美婷、五月火、阿姆肯、春美、锦春、锦花、美锦。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，其特征在于：步骤3)所述的高效液相色谱仪，选自岛津LC-20AT。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，其特征在于：步骤3)所述的用甲醇稀释成不同浓度梯度的溶液，是得到0.008mg/mL、0.001mg/mL、0.0012mg/mL、0.0016mg/mL、0.0020mg/mL、0.0024mg/mL浓度的溶液。