[发明专利]一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，根据桃花芽中脱落酸(ABA)含量在解除休眠前保持较高水平，在解除休眠后急剧下降的情况，本发明主要是在冬季大量落叶期前后15d采用测定花芽中脱落酸含量的方法鉴定区分极低需冷量(300h)桃种质资源。

【技术领域】

本发明属于植物育种技术领域，具体涉及一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法。

【背景技术】

桃(Prunus persica L.)是蔷薇科(Rosaceae)、李属(Prunus L.)、桃亚属(Amygdalus L.)的多年生中型乔木。原产于我国陕西、甘肃、西藏等西部冷凉地区，需要一定的需冷量完成休眠才能进入雌雄性细胞分化阶段。需冷量是指打破落叶果树自然休眠所需的有效低温时数，一般以气温≤7.2℃为计算起点。当桃树需冷量不能满足时，萌芽不整齐且花期长，花而不实，产量得不到保证。因此，需冷量是南方桃种植成功与否的关键因素之一。目前，按需冷量高低来分类，桃可分为极低需冷量(300h)、低需冷量(300-600h)、中需冷量(600-900h)、高需冷量(900-1200h)、极高需冷量(1200h)5个等级。

目前已有相关的研究，例如中国专利申请号201410264421.5公开了快速测定桃需冷量的方法，在桃落叶后，每隔4-5天采桃当年生枝条3-5枝，枝条长20-30cm，每个桃品种枝条上花芽叶芽各不少于20个，枝条在室内插入水中2-3cm，每隔3天剪一次桃枝条下部露出新茬，每隔三天换水清洁处理一次，室内温度白天23-25℃，晚上15-17℃，时间为白/黑＝14/10h，湿度60-70％，枝条光照强度2500LX，以叶芽露顶50％和花芽顶部绽开50％代表其花芽和叶芽满足其自身需冷量；再辅以需冷量模型来统计需冷量，进而测定出桃的需冷量。

又例如中国专利申请号202111261417.X公开了一种基于qRT-PCR检测方法快速测算桃品种需冷量的方法，步骤如下：(一)PpDAM5基因相对表达量的检测；(二)PpDAM5基因相对表达量与需冷量的等级划分；(三)待测桃品种快速测算；该方法以已确定需冷量品种作为标准物，选取桃品种落叶时叶片进行PpDAM5基因表达量测定，建立需冷等级划分模型，将需冷量待测桃新品种进行PpDAM5基因相对表达量检测，然后根据建立的需冷量等级划分模型进行匹配，可以初步快速测算待测桃品种需冷量。

总的来说，桃需冷量的测定方法主要有以下几种：

(1)水培法：冬季落叶后每隔3-5d剪取当年生枝条10-20根插入深2-3cm水中，放置于人工气候箱，21d后统计萌芽率，当萌芽率超过50％时表示需冷量得到满足，同时统计期间气温低于7.2℃的小时数即为该品种的需冷量；

(2)对照品种法：利用一系列对照品种测定待测品种的需冷量，在国外普遍应用，从田间每隔7d同时采样待测桃品种和对照桃品种(方法同水培法)，在温室中21d后，比较所测定品种与对照品种萌芽率，则可知测定品种的需冷量；

(3)分子标记鉴定：2019年，中国农业科学院郑州果树研究所桃课题组采用分子标记技术鉴定。

上述方法的缺陷是：一是在人工气候条件下进行测定，枝条剪下后处于离体状态，无法完全模拟田间自然条件，营养物质运输与萌芽均受到一定影响，从而导致测定结果误差较大；二是工作量大，效率低；三是采用分子标记技术只能鉴定区分500h以上的桃种质资源，500h以下品种无法区分。

【发明内容】

针对以上现有技术的不足，本发明提供了一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，根据桃花芽中脱落酸含量在大量落叶期保持稳定水平，本发明主要通过测定大量落叶期桃花芽中脱落酸含量鉴定区分极低需冷量(300h)桃种质资源。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种鉴定极低需冷量桃种质资源的方法，包括如下步骤：

1)选取生长健康的不同需冷量桃种质资源；