[发明专利]一种HBB融合基因修饰的自体造血干细胞、制备方法及其应用有效
| 申请号： | 202210392297.5 | 申请日： | 2022-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN114480293B | 公开（公告）日： | 2022-07-12 |
| 发明（设计）人： | 刘明录;张传鹏;韩庆梅;强邦明;王立新;冯建海;金海锋;许淼 | 申请（专利权）人： | 山东兴瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N5/0789;C12N15/867;C12N15/62 |
| 代理公司： | 山东华君知识产权代理有限公司 37300 | 代理人： | 武欢欢 |
| 地址： | 261500 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 hbb 融合 基因 修饰 造血 干细胞 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种HBB融合基因修饰的自体造血干细胞，其特征在于：所述HBB融合基因由以下模块依次串联得到：DNase I超敏位点HS2、DNase I超敏位点HS3、DNase I超敏位点HS4、启动子、增强子、HSb T88Q；
所述DNase I超敏位点HS2的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示；
所述DNase I超敏位点HS3的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示；
所述DNase I超敏位点HS4的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所示；
所述启动子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.5所示；
所述增强子的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.6所示；
所述HSb T88Q的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.7所示；
所述自体造血干细胞为CD34+细胞。
2.根据权利要求1所述的HBB融合基因修饰的自体造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括重组表达载体pCDH-HBB的构建、慢病毒的包装、重组慢病毒感染CD34+细胞。
3.根据权利要求2所述的HBB融合基因修饰的自体造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述重组表达载体pCDH-HBB的构建，将HBB融合基因插入pCDH载体，获得重组表达载体pCDH-HBB。
4.根据权利要求2所述的HBB融合基因修饰的自体造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述慢病毒的包装，采用重组表达载体pCDH-HBB转染复苏后的293T细胞，得到重组慢病毒，所述重组慢病毒的滴度为1.52×108TU/mL。
5.根据权利要求4所述的HBB融合基因修饰的自体造血干细胞的制备方法，其特征在于：所述重组慢病毒感染CD34+细胞，将重组慢病毒与CD34+细胞的比例控制为50:1进行培养、筛选、扩大培养得到HBB融合基因修饰的CD34+细胞。
6.权利要求1所述的HBB融合基因修饰的自体造血干细胞在制备治疗镰状细胞病和
β-地中海贫血的药物中的应用。
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