[发明专利]一种具有益生活性的酰化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的制备方法

说明书

一种具有益生活性的酰化矢车菊素‑3‑O‑葡萄糖苷的制备方法，包括以下处理步骤：（1）原料预处理；（2）加湿与细粉碎；（3）制备花色苷浸提液；（4）离心；（5）超滤、（6）纳滤、（7）树脂纯化、（8）制备黑米花色苷、（9）酶法酰基化和（10）对益生菌的增殖作用。本发明制得的酰基化黑米花色苷，益生活性得到提高；利用制备型液相色谱分离纯化花色苷修饰产物，得到矢车菊素‑3‑O‑癸酰葡萄糖苷，纯度≥95%，可作为花色苷理论研究的材料。

技术领域

本发明涉及一种具有益生活性的酰化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的制备方法，属于食品加工技术领域。

背景技术

花色苷是一类特殊的黄酮类化合物，广泛存在于水果和蔬菜中，使它们呈现鲜艳的色彩。矢车菊素-3-O-葡萄糖苷属于花色苷，具有许多生物活性，包括抗氧化，抗炎，抗肿瘤以及预防肥胖、糖尿病和心血管疾病等多种慢性病的作用。益生元的概念由国际“益生元之父”-格伦·吉布索于1995年提出，系指一些不被宿主消化吸收却能够选择性地促进体内有益菌的代谢和增殖，从而改善宿主健康的有机物质。现在，一般认为益生元能给益生菌提供“食物”，益生元能够被肠道内有益细菌分解吸收，促进有益细菌生长繁殖。花色苷是一类具有该种益生活性的物质。它们可以促进肠道内双歧杆菌和乳杆菌等有益菌的增殖和抑制产气荚膜梭状孢芽杆菌和沙门氏菌等有害菌的生长。但由于天然花色苷容易受到外界因素的影响而降解，它们的作用是有限的。因此，采用了一些方法来提高它们的稳定性及生物活性。

近年来，酰化在改善其稳定性和提升其生物活性方面取得了实质性进展。不同链长的脂肪酸已被应用于花色苷的酰化，例如来自高山熊果的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、来自红酒的锦葵素-3-O-葡萄糖苷来自黑醋栗的飞燕草素-3-O-葡萄糖苷、飞燕草素-3-O-芦丁苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷和矢车菊素-3-O-芸香苷。不同链长的饱和脂肪酸酰化的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的热稳定性，pH耐受力和脂溶性都显著优于未酰化的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷。我们在前期的试验中发现，将黑米花色苷的主要单体矢车菊素-3-O-葡萄糖苷，以化学或者生物酶为催化剂，在非水环境中与酰基供体产生酰基化反应，得到的酰化物稳定性显著提高，而且益生活性也较大地提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有益生活性的酰化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的制备方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种具有益生活性的酰化矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的制备方法，包括下列步骤：

步骤1：将黑米与水按质量体积比1kg:10~20L混合，然后研磨至细度为5~25µm，得到黑米浆液；

步骤2：向黑米浆液中添加柠檬酸，调节浆液pH值为2.5~4.0。然后，在20~55℃下，浸提2~6 h，得到黑米花色苷浸提液；

步骤3：对黑米花色苷浸提液进行离心，去除杂质后得到水提液；

步骤4：将水提液放入截留分子量为3000 Da的超滤膜设备的料液桶中，操作压力为0.3 Mpa，收集超滤流出液；

步骤5：将超滤流出液通过截留分子量为200~400Da的纳滤膜，操作压力为0.2Mpa；收集浓缩截留液，得到黑米花色苷截留液；

步骤6：将黑米花色苷截留液上聚酰胺树脂柱，上样液量为2~2.5倍树脂柱体积，上样流速为0.8-1.2倍柱体积/小时，当流出液澄清后，以乙醇洗脱树脂柱，洗脱液为2-3倍树脂柱体积，流速为0.8-1.2倍柱体积/小时；将洗脱液在40-50℃下蒸发除去乙醇，得到黑米花色苷浓缩液；

步骤7：对黑米花色苷浓缩液进行冷冻干燥，至水分含量小于或等于5%，得到黑米花色苷粉末；

步骤6：向干燥的叔戊醇中加入黑米花色苷和癸酸，搅拌混合均匀，接着加入干燥Novozym435脂肪酶，最后加入4A分子筛，在50~55℃下振荡反应24~48h；反应完成后进行过滤，滤液干燥后通过萃取和半制备液相色谱法对产物进行分离和纯化；将分离液冷冻干燥至水分含量小于5%，得到紫黑色的矢车菊素-3-O-癸酰葡萄糖苷粉末。