[发明专利]一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备

权利要求书

1.一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，其包括：

分别对多株候选株的细胞培养物进行宏基因组测序，获得候选株的病原丰度和外源因子丰度；

分别对多株候选株的病原丰度和外源因子丰度按照数值大小进行排序，将病原丰度值≥N％的候选株且外源因子丰度值≤M％的候选株的毒株进行保留，用于后续筛选或灭活疫苗的开发，N和M均为50～99。

2.根据权利要求1所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，N和M为70～99。

3.根据权利要求1所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，进行宏基因组测序后，所述检测方法还包括：针对每株候选株，对比病原丰度值与除病原外的其他微生物丰度值的大小，仅保留病原丰度值＞与除病原外的其他微生物丰度值的毒株，用于后续筛选或疫苗开发。

4.根据权利要求1～3任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，进行宏基因组测序后，所述检测方法还包括：针对每株候选株，对除病原外的其他微生物按照丰度值大小进行排序，将丰度值较大的微生物及其丰度值与阴性对照的微生物及其丰度值进行比对，若差异不显著，则保留该候选株，若差异显著，则去除该候选株；其中，所述阴性对照为实验组细胞本底的检测结果；

优选地，所述丰度值较大的微生物是指：丰度值较大的前1～10位；

优选地，所述丰度值较大的微生物是指丰度值较大的前10位；

优选地，所述差异显著是指：微生物种类不同，或任意微生物丰度值之间相差≥20％。

5.根据权利要求1～3任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括对不同代次的候选株进行检测；

优选地，所述不同代次包括至少2代。

6.根据权利要去1～3任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，进行宏基因组测序前，所述候选株的名称、来源、分离过程和传代清楚的毒株；

优选地，进行宏基因组测序前，所述候选株为经过常规的鉴别试验和/或无菌检查后获取的毒株；

优选地，进行宏基因组测序前，候选株的外源因子为普通PCR无法检测到的水平。

7.根据权利要求1～3任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，所述多株候选株的数量≥2；

优选地，所述多株候选株的数量≥5。

8.根据权利要求1～3任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其特征在于，所述病原包括新冠病毒；

优选地，所述外源因子包括除新冠病毒以外的病原微生物；

优选地，所述外源因子包括支原体。

9.一种灭活疫苗候选株的筛选方法，其特征在于，其包括：采用如权利要求1～8任一项所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法对候选株进行过滤；

优选地，在进行所述外源因子检测前，所述筛选方法还包括：对候选株进行常规的鉴别试验和/或无菌检查；

优选地，在进行所述外源因子检测前，所述筛选方法还包括：对候选株进行常规的外源因子检测，使得过滤后候选株中的外源因子水平为普通PCR无法检测的水平；

优选地，所述筛选方法还包括对所述外源因子检测方法过滤后的候选株建立三级种子库，并采用所述外源因子检测方法对三级种子库不同代次的培养物进行检测过滤；

优选地，在进行所述外源因子检测方法后，所述筛选方法还包括：候选株进行扩增能力和感染性滴度检测、免疫原性检查以及减毒特性检查中的至少一种。

10.一种灭活疫苗的制备方法，其特征在于，其包括：采用如权利要求9项所述的灭活疫苗候选株的筛选方法获得的候选株进行灭活疫苗的制备。