[发明专利]一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备

说明书

本发明公开了一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备，涉及生物医药技术领域，本发明基于高通量测序技术的宏基因组测序的手段，基于候选株中病原丰度和外源因子丰度对候选株进行筛选，能够更有效地检测外源因子的引入，为灭活疫苗的安全性提供了有利保障，且该方法具备高效、快捷的特点，适用于推广。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备。

背景技术

制备灭活疫苗，需要对候选株进行遗传背景筛查以及外源因子检测，传统的检测外源因子的方法，是通过支原体引物进行PCR扩增，采用电泳凝胶成像系统进行目标产物的确认，只能定性分析是否该样本含有相应的支原体。而一般情况下，普通PCR的灵敏度较低(1000拷贝/毫升)。无法有效快速地实现对于外源因子的检测。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法以及灭活疫苗候选株的筛选和灭活疫苗的制备。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供了一种灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其包括：分别对多株候选株的细胞培养物进行宏基因组测序，获得候选株的病原丰度和外源因子丰度；分别对多株候选株的病原丰度和外源因子丰度按照数值大小进行排序，将病原丰度值≥N％的候选株且外源因子丰度值≤M％的候选株的毒株进行保留，用于后续筛选或灭活疫苗的开发，N 和M均为50～99。

第二方面，本发明实施例提供了一种灭活疫苗候选株的筛选方法，其包括：采用如前述实施例所述的灭活疫苗候选株的外源因子检测方法对候选株进行过滤。

第三方面，本发明实施例还提供了一种灭活疫苗的制备方法，其包括：采用如前述实施例所述的灭活疫苗候选株的筛选方法获得的候选株进行灭活疫苗的制备。

本发明具有以下有益效果：

本发明基于高通量测序技术的宏基因组测序的手段，基于候选株中病原丰度和外源因子丰度对候选株进行筛选，能够更有效地检测外源因子的引入，为灭活疫苗的安全性提供了有利保障，且该方法具备高效、快捷的特点，适用于推广。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

首先，本发明实施例提供了灭活疫苗候选株的外源因子检测方法，其包括以下步骤：

分别对多株候选株的细胞培养物进行宏基因组测序，获得候选株的病原丰度和外源因子丰度；

分别对多株候选株的病原丰度和外源因子丰度按照数值大小进行排序，将病原丰度值≥N％的候选株且外源因子丰度值≤M％的候选株的毒株进行保留，用于后续筛选或灭活疫苗的开发，N和M均为50～99。

本文中的“外源因子检测方法”可以理解为针对外源因子进行检测，并基于检测结果进行过滤，尤其适用于存在多株候选株的情况下，通过病原丰度和外源因子的丰度，过滤掉外源因子引入较多的候选株，有效实现候选株的筛选，进一步提高筛选株的安全性和有效性，避免了筛选制备灭活疫苗后再出现安全性和有效性的问题，缩短了灭活疫苗制备的成本和时间。

本文中“候选株的细胞培养物”是指将候选株接种于细胞中进行培养，从而获得的培养物，接种方法和培养方法均可以参照现有公开的技术获得，不再赘述。