[发明专利]一种霍利迪连接体解离酶DrRuvC及其编码基因和应用

权利要求书

1.来源于耐辐射奇球菌的霍利迪连接体解离酶DrRuvC，其特征在于其氨基酸序列见SEQ NO.4。

2.编码权利要求1所述的霍利迪连接体解离酶DrRuvC的基因，其特征在于其核苷酸序列见SEQ NO.3。

3.含有权利要求2所述基因的表达载体。

4.权利要求1所述酶DrRuvC在解离连接结处含有5’-(G/C)TC(G/C)-3’序列的霍利迪连接体上的应用。

5.一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于具体是将10μl反应体系置于40-45℃反应30分钟，随后加入等体积终止液A终止反应，于100℃加热20分钟，转移至冰上骤冷，随后利用TBE尿素胶分离产物；

所述10μl反应体系中含有1μM的权利要求1所述酶DrRuvC、500nM的连接结处含有5’-(G/C)TC(G/C)-3’序列的霍利迪连接体底物、50-150mM NaCl、一定浓度金属离子、pH7.6-8.4的20mM Tris、0.5mM TCEP、5％甘油；

所述金属离子为Mn或Mg。

6.如权利要求5所述一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于所述终止液A为20mMEDTA和98％甲酰胺。

7.如权利要求5或6所述一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于所述金属离子为Mn时，反应体系中Mn离子浓度为2.5-10mM；所述金属离子为Mg时，反应体系中Mg离子浓度为20mM。

8.一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于具体是将10μl反应体系置于40-45℃反应30分钟，随后加入等体积终止液B终止反应，于37℃终止反应20分钟后，利用TBE活性胶分离产物；

所述10μl反应体系中含有1μM的权利要求1所述酶DrRuvC、500nM的连接结处含有5’-(G/C)TC(G/C)-3’序列的霍利迪连接体底物、50-150mM NaCl、一定浓度金属离子、pH7.6-8.4的20mM Tris、0.5mM TCEP、5％甘油；

所述金属离子为Mn或Mg。

9.如权利要求8所述一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于所述终止液B为20mMEDTA和10mg/mL蛋白酶K。

10.如权利要求8或9所述一种霍利迪连接体解离方法，其特征在于所述金属离子为Mn时，反应体系中Mn离子浓度为2.5-10mM；所述金属离子为Mg时，反应体系中Mg离子浓度为20mM。