[发明专利]一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法

权利要求书

1.一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)筛选符合生物样本供者健康要求的个体进行样本的采集；

2)将采集的内脏网膜脂肪组织迅速转移至冰上；

3)去除脂肪组织的纤维成分，剪碎后使用消化液消化；

4)过滤，KRHB缓冲液作为洗涤液，使用分液漏斗洗涤，将洗涤后的细胞溶液转移至50ml离心管中；

5)50g离心3min，溶液分3层，从上到下依次为游离脂质、成熟脂肪细胞和洗涤液，使用注射器将离心管中游离脂质和洗涤液完全去除。

6)根据切点值选择滤网，将滤网置于培养皿中，将脂肪细胞轻柔吸出，经滤网过滤，小于滤孔的脂肪细胞转移至培养皿中，再使用洗涤液洗涤滤网上层细胞，将滤网上层大于滤孔的细胞转移至收集管中。

2.根据权利要求1所述的一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，所述步骤3)中消化条件为37℃消化40min，所述消化液组分包括含钙镁的HBSS、2％BSA、2型胶原酶，所述2型胶原酶浓度为3mg/g。

3.根据权利要求1所述的一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，所述步骤4)中过滤时，使用250μm细胞筛；所述KRHB缓冲液包括1*KRH、25mM HEPES、2mM glucose、2％BSA，洗涤时，使用1L KRHB缓冲液洗涤3次。

4.根据权利要求1所述的一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，所述步骤5)中所述注射器还包括18号针头。

5.根据权利要求1所述的一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，所述步骤6)中所述培养皿直径为10cm。

6.根据权利要求1所述的一种根据切点值精确筛选不同大小脂肪细胞的方法，其特征在于，所述步骤6)中根据切点值96μm，滤网为160目，其滤孔尺寸为96μm，经滤网过滤，小于96μm的脂肪细胞过滤转移至培养皿中，滤网上层大于96μm的细胞转移至50ml的离心管中。