[发明专利]一种化妆品中12种染发剂的含量测定和质谱确证方法

权利要求书

1.一种化妆品中12种染发剂的含量测定和质谱确证方法，其特征在于，所述12种染发剂包括1-羟乙基-4，5-二氨基吡唑硫酸盐、羟乙基对苯二胺硫酸盐、2-氨基-6-氯-4-硝基苯酚、羟苯并吗啉、2-氨基-4-羟乙氨基茴香醚硫酸盐、6-甲氧基-2-甲氨基-3-氨基吡啶盐酸盐、2-甲基-5-羟乙氨基苯酚、1，3-双-(2，4-二氨基苯氧基)丙烷盐酸盐、5-氨基-6-氯-O-甲酚、碱性黄87号、碱性红51号和HC黄2号；

所述方法包括如下步骤：

步骤一，标准工作溶液的配制：精密称取对照品，采用包括亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇的混合溶液进行溶解，并定容，制备成各个对照品的浓度均为200～1000μg·mL^-1的混合对照品储备液；然后用亚硫酸氢钠水溶液稀释制得一系列梯度浓度的标准工作溶液；

步骤二，样品前处理：准确称取样品，采用包括亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇的混合溶液进行溶解，涡旋混匀后进行超声提取，冷却后加入亚硫酸氢钠水溶液定容，混匀，离心，取上清液经微膜过滤制备成样品工作液；

步骤三，检测：采用高效液相色谱法测定染发剂的含量和/或采用高效液相色谱-串联质谱法进行确证。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包括亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇的混合溶液由亚硫酸氢钠水溶液和无水乙醇按照体积比为1∶1～2配制而成；所述亚硫酸氢钠水溶液的浓度为1.2～2.5g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述一系列梯度浓度分别为1、5、20、50、100、200μg·mL^-1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中样品前处理还包括设置空白对照样品。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，超声提取的条件为：冰浴，10～20min。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，离心的条件为：3000～5000rpm，5～10min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微膜的孔径为0.2～0.45μm。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的测定条件如下：

色谱柱：菲罗门Titank C₁₈，4.6mm×250mm，5μm；

流动相：A相为10mmol/L磷酸氢二钾溶液，B相为甲醇，C相为乙腈；

梯度洗脱程序：0～5min，2％B，2％C；5～6min，2％～20％B，2％C～0％C；6～18min，20％～25％B；18～18.1min，25％～6％B，0％～19％C；18.1～37min，6％～8％B，19％～27％C；37～37.1min，8％～10％B，27％～40％C；37.1～47min，10％B，40％C；47～47.1min，10％～2％B，40％～2％C；47.1～50min，2％B，2％C；

柱温为25～40℃；

流速为0.8～1.5mL·min^-1；

进样量为3～7μL。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱-串联质谱法采用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱仪，其检测条件如下：

(1)色谱条件

色谱柱：AgilentPoroshell 120Bonus-RP C₁₈柱，3.0mm×150mm，2.7μm；

流动相：A相为5mmol/L乙酸铵溶液，B相为乙腈；

梯度洗脱程序为：0～2min，100％A；2～8min，100％～80％A；8～15min，80％～30％A；15～15.1min，30％～5％A；15.1～18min，5％A；18～22min，100％A：

柱温为25～35℃；

流速为0.2～0.4mL·min^-1；

进样量为1.4～2.4μL；

(2)质谱条件

电喷雾离子源，正离子电离模式及负离子电离模式；

毛细管电压：2.0～3.0kV；

干燥气温度：200～300℃；干燥气流量：10～16L·min^-1；

鞘气温度：350～400℃；鞘气流速：12L～18·min-¹；

碎裂电压：300～380V；

检测方式：多反应监测模式。