[发明专利]一种大豆北方茎溃疡病菌检测用引物探针及试剂盒和检测方法在审
| 申请号： | 202210405282.8 | 申请日： | 2022-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN114574625A | 公开（公告）日： | 2022-06-03 |
| 发明（设计）人： | 段维军;李雪莲;吕燕;张慧丽 | 申请（专利权）人： | 宁波检验检疫科学技术研究院(宁波国检贸易便利化服务中心) |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 宁波诚源专利事务所有限公司 33102 | 代理人： | 陈洪娜;陈蕾 |
| 地址： | 315000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大豆 北方 溃疡 病菌 检测 引物 探针 试剂盒 方法 | ||
1.一种大豆北方茎溃疡病检测用引物，其特征在于，
正向引物DCF的核苷酸序列为：5'-CGGCCA AGCTAACTCTTGTTTT-3'，
反向引物DCR的核苷酸序列为：5'-AGATCCGTTGTTGAA AGTTTTGATT-3'。
2.一种大豆北方茎溃疡病检测用探针，其特征在于，
所述探针DCP的核苷酸序列为：5'-CACTGA AACTCTGAGAAAT-3'。
3.如权利要求2所述的大豆北方茎溃疡病检测用探针，其特征在于，所述探针DCP的5'端含有FAM报告荧光染料，而3'端含有不发荧光的淬灭基团并具有MGB分子。
4.一种大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒，其特征在于，具有如权利要求1所述的大豆北方茎溃疡病检测用引物。
5.如权利要求4所述的大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒，其特征在于，还具有如权利要求2或3所述的大豆北方茎溃疡病检测用探针。
6.如权利要求5所述的大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒，其特征在于，还包括2xUniversal PCR Master Mix反应缓冲液。
7.如权利要求5所述的大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒，其特征在于，所述正向引物DCF、反向引物DCR以及探针DCP的终浓度均为10μmol/L。
8.一种大豆北方茎溃疡病的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)待测样品DNA提取；
(2)利用如权利要求1所述的引物及权利要求2或3所述的探针进行实时荧光PCR反应；
(3)结果判定：观察反应扩增曲线及其Ct值，若有特异性扩增，Ct值超过阈值即为大豆北方茎溃疡病菌。
9.如权利要求8所述的大豆北方茎溃疡病的检测方法，其特征在于，应用有如权利要求6或7所述的大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒。
10.如权利要求9所述的大豆北方茎溃疡病的检测方法，其特征在于，PCR反应体系：反应缓冲液5μL，正向引物DCF和反向引物DCR各0.5μL，探针DCP0.6μL，加入1μL模板DNA溶液，用灭菌双蒸水定容至10μL，进行实时荧光PCR反应；
实时荧光PCR反应条件为：50℃ 30min；95℃ 15min；然后94℃ 15s，60℃ 60s，共40个循环。
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