[发明专利]一种大豆北方茎溃疡病菌检测用引物探针及试剂盒和检测方法

说明书

本发明涉及一种大豆北方茎溃疡病检测用引物探针及试剂盒和检测方法，本发明中的检测方法具有操作简单、快速以及准确率高的优点，为实现对大豆北方茎溃疡病菌在感病植株上的快速鉴定检测打下理论基础，并且，该检测方法不仅能检测具有较多鉴定特征的大豆北方茎溃疡病菌成熟菌丝体，还可以对形态特征与大豆北方病茎溃病菌相似的近似种进行有效区分。其中，本发明中的引物和探针特异性强，而本分明中的试剂盒具有快速简单、特异性强、灵敏度高以及交叉污染低的优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大豆北方茎溃疡病菌检测用引物探针及试剂盒和检测方法。

背景技术

大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora)，其无性型为Phomopsis phaseoli，属于真菌界Fungi、子囊菌门Ascomycota、子囊菌亚门Pezizomycotina，粪壳菌纲Sordariomycetes，间座壳目Diaporthales、间座壳科Diaporthaceae，间座壳属Diaporthe。大豆北方茎溃疡病菌主侵染植株的茎杆和叶片，导致植株死亡，造成大豆产量降低，是比较典型的大豆上毁灭性病害之一。大豆北方茎溃疡病菌于20世纪40年代后期至50年代早期在美国中北部和加拿大被发现，1950年病原菌被鉴定为Diaporthe phaserlorum var.batatatis，Crall将其命名为大豆茎溃疡病菌大豆北方茎溃疡病菌，现主要分布于北美洲的美国、加拿大，南美洲的阿根廷、巴西、厄瓜多尔，大洋洲的澳大利亚，欧洲的保加利亚、克罗地亚、南斯拉夫、法国、意大利、俄罗斯、塞尔维亚等。

20世纪50年代，该病菌在美国中北部地区造成了主要的作物损失，多达80％的植物感染，单田产量减少了50％。鉴于其严重危害性，该病菌于2007年被列入我国进境植物检疫性有害生物名录。对于大豆北方茎溃疡病菌检测，目前主要以形态学加普通PCR方法鉴别，该种检测方法存在鉴定周期长、时效性差等问题。而标准SN/T 3399-2012《大豆茎溃疡病菌检疫鉴定方法TaqMan MGB探针实时荧光PCR检测方法》中的实时荧光检测方法，对大豆北方茎溃疡的近似种也产生了特异性扩增，出现假阳性等问题。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种特异性强的大豆北方茎溃疡病菌检测用引物。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种特异性强的大豆北方茎溃疡病菌检测用探针。

本发明所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种灵敏性高、检测准确率高的大豆北方茎溃疡病菌检测用试剂盒。

本发明所要解决的第四个技术问题是针对现有技术而提供一种检测准确率高的大豆北方茎溃疡病菌的检测方法。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种大豆北方茎溃疡病检测用引物，其特征在于，

正向引物DCF的核苷酸序列为：5'-CGGCCA AGCTAACTCTTGTTTT-3'(如SEQ ID NO.2所示)，

反向引物DCR的核苷酸序列为：5'-AGATCCGTTGTTGAA AGTTTTGATT-3'(如SEQ IDNO.3所示)。

为进一步解决上述第二个技术问题所采用的技术方案为：一种大豆北方茎溃疡病检测用探针，其特征在于，

所述探针DCP的核苷酸序列为：5'-CACTGA AACTCTGAGAAAT-3'(如SEQ ID NO.4所示)。

进一步，所述探针DCP的5'端含有FAM报告荧光染料，而3'端含有不发荧光的淬灭基团并具有MGB分子。

为进一步解决上述第三个技术问题所采用的技术方案为：一种大豆北方茎溃疡病检测用试剂盒，其特征在于，具有如上所述的大豆北方茎溃疡病检测用引物。