[发明专利]一种2-乙酰王百合苷A对照品的制备方法

权利要求书

1.一种2-乙酰王百合苷A对照品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，百合液提取；对百合鳞茎通过温浸、过滤、提取液合并，并获得百合提取液；

步骤1中百合液提取的步骤为：

步骤1.1，将百合鳞茎加入80%甲醇或乙醇中在65℃温度下进行浸泡；

步骤1.2，将浸泡后所得溶液进行多次过滤，去除残留的固体物；

步骤1.3，将步骤1.2所得过滤后的提取液进行合并；

步骤1.4，将步骤1.3所得提取液中的乙醇通过降低压强的方式进行分离并回收，同时获得百合液提取液；

步骤2，2-乙酰王百合苷A粗品制备；对步骤1获得的百合提取液通过离心、聚合物吸附色谱、梯度洗脱、浓缩的方式获得2-乙酰王百合苷A的粗品；

步骤2中2-乙酰王百合苷A粗品制备的步骤为：

步骤2.1，对步骤1中所得的百合提取液通过离心装置进行离心，去除固形物，获得离心后溶液；

步骤2.2，对步骤2.1中所得离心后溶液通过水进行稀释，并获得稀释后的溶液；

步骤2.3，对步骤2.2中所得稀释后的溶液通过吸附色谱；

步骤2.4，对步骤2.3中吸附色谱填料水洗脱至无色，并弃去洗脱液；

步骤2.5，对步骤2.4中吸附色谱填料用甲醇或乙醇洗脱至无色，6个柱体积，收集洗脱液；

步骤2.6，对步骤2.5中使用的色谱柱通过甲醇或乙醇进行清洗，以待再生色谱填料重复使用；

步骤2.7，对步骤2.5所收集的洗脱液浓缩至无醇味，并得到初步浓缩液；

步骤2.8，对步骤2.7中所得的初步浓缩液再次通过吸附色谱填料，而后通过甲醇或乙醇对吸附填料进行洗脱，并对所得的洗脱液进行浓缩，并获得2-乙酰王百合苷A粗品；

步骤2中的吸附色谱为NM-200聚合物色谱；

步骤3，2-乙酰王百合苷A粗品的制备液相分离纯化；对步骤2所得的2-乙酰王百合苷A粗品通过溶解、微孔滤膜过滤、制备液相分离纯化、浓缩、结晶后得2-乙酰王百合苷A结晶；

步骤3中2-乙酰王百合苷A粗品的纯化结晶的步骤为：

步骤3.1，对步骤2中所得的2-乙酰王百合苷A粗品加水溶解；

步骤3.2，对步骤3.1中所得的2-乙酰王百合苷A粗品溶液通过微孔滤膜进行过滤；

步骤3.3，对步骤3.2中所得过滤后的2-乙酰王百合苷A粗品溶液通过制备型高效液相色谱进行纯化，同时通过紫外检测器波长310nm监视流出曲线，依据流出曲线，收集流出液；

步骤3.4，对步骤3.3中所得流出液浓缩至无醇味，并经NM-200聚合物吸附色谱填料，待上样后，用甲醇或乙醇进行洗脱，并将浓缩洗脱液，静置24h，析出2-乙酰王百合苷A结晶；

步骤3.3中制备型高效液相色谱的色谱柱为十八烷基键合硅胶；

流动相为乙腈-水，且乙腈-水的比例为15：85；

步骤4，2-乙酰王百合苷A的获取；通过溶解及静置结晶获得2-乙酰王百合苷A；

步骤4中2-乙酰王百合苷A的获取步骤为：

步骤4.1，取步骤3所得的2-乙酰王百合苷A结晶用甲醇溶解，晶体与甲醇的比例为1g：10ml至1g：15ml；

步骤4.2，对步骤4.1溶解后的2-乙酰王百合苷A溶液静置并等待再次结晶；

步骤4.3，重复步骤4.1与步骤4.2两次至三次，最终得得2-乙酰王百合苷A。

2.根据权利要求1所述的2-乙酰王百合苷A对照品的制备方法，其特征在于，步骤2.5中甲醇或乙醇的浓度为20%-40%、步骤2.6中甲醇或乙醇的浓度为80%-100%及步骤2.8中甲醇或乙醇的浓度为80%-100%。

3.根据权利要求1所述的2-乙酰王百合苷A对照品的制备方法，其特征在于，流动相的流速为180ml/min。