[发明专利]用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的引物、荧光探针和试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的引物和荧光探针，其特征是，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物如序列表中SEQ ID NO.1；所述反向引物如序列表中SEQ IDNO.2；所述荧光探针如序列表中SEQ ID NO.3。

2.根据权利要求1所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的引物和荧光探针，其特征是，所述荧光探针的5’端和3’端分别用荧光报告基团和淬灭基团修饰。

3.根据权利要求2所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的引物和荧光探针，其特征是，修饰所述5’端的所述荧光报告基团为：FAM、HEX、ROX、Cy3或Cy5，修饰所述3’端淬灭基团为：TAMRA NHS、BHO1、BHO2、BHO3或Eclipse。

4.包含权利要求1-3任一项所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的引物和荧光探针的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，所述正向引物的终浓度为0.1～0.3μM，所述反向引物的终浓度为0.1～0.3μM，所述荧光探针的终浓度为0.3～0.6μM。

6.根据权利要求4或5所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，还包括：PCR反应液、核酸释放试剂、阴性质控品和阳性质控品。

7.根据权利要求6所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，所述PCR反应液包括：无菌水、具有5’→3’外切活性的DNA聚合酶、dNTP、10×PCR Buffer和含Mg离子的溶液。

8.根据权利要求6所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，所述PCR反应液中所述Taq酶的终浓度为0.01～0.03U/μL，所述dNTPs的终浓度为0.2～0.4mM，所述10×PCR Buffer为原浓度的1/10，所述MgCl₂的终浓度为1.5～3.0mM，溶剂为无菌水。

9.根据权利要求6所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，所述核酸释放试剂包括：无菌水、Triton-X100、NP-40和Tris-HCL；所述阴性质控品为不含鰤鱼诺卡氏菌的ITS基因的PMT18-T载体质粒DNA；所述阳性质控品为含有所述鰤鱼诺卡氏菌的ITS基因片段的PMT18-T载体质粒DNA，浓度为50ng/μL；所述具有5'→3'外切活性的DNA聚合酶为Taq酶。

10.根据权利要求6所述的用于检测鰤鱼诺卡氏菌核酸的试剂盒，其特征是，所述核酸释放试剂中所述Triton-X100的终浓度为0.03～0.3％，所述NP-40的终浓度为0.04～0.4％，所述Tris-HCL的终浓度为0.01～0.1M，溶剂为无菌水；所述Tris-HCL的pH值为7.8～8.2。