[发明专利]一种pSFV-flagX-CMV复制子质粒、制备方法和鸡尾酒混合疫苗

权利要求书

1.一种pSFV-flagX-CMV复制子质粒，其特征在于，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505-7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505-7R基因序列依次如SEQ ID NO.15-NO.21所示。

2.一种如权利要求1所述的pSFV-flagX-CMV复制子质粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)构建得到pXJ40-FlagpX质粒，以pXJ40-FlagpX质粒为模板扩增FlagpX片段；

(2)将FlagpX片段克隆至含塞姆利基森林病毒复制子的载体，得到pSFV-FlagpX-CMV；

所述pXJ40-FlagpX质粒的制备方法如下：

(1)用BamHI/SmaI酶切，双酶切线性化pXJ40-flag载体；

(2)将SEQ ID NO.15-NO.21任一所示的ASFV p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505-7R和M1249L基因分别插入所述pXJ40-flag载体而得。

3.根据权利要求2所述的pSFV-flagX-CMV复制子质粒的制备方法，其特征在于，含塞姆利基森林病毒复制子的载体的制备方法为：

S1.用EGFP基因取代pSFVCs-lacZ中的lacZ序列，得到质粒pSFVCs-EGFP；

S2.将pSFVCs-EGFP质粒中的SP6启动子更换为CMV启动子，得到质粒pSFVCs-EGFP-CMV；

S3.删除pSFVCs-EGFP-CMV质粒中的SFV病毒壳膜蛋白序列，得到质粒pSFV-EGFP-CMV。

4.根据权利要求3所述的pSFV-flagX-CMV复制子质粒的制备方法，其特征在于，步骤S1具体操作过程如下：

A.用BamHI/SmaI双酶切pSFVCs-lacZ质粒DNA，胶纯化11845bp不含lacZ基因序列的片段1；

B.以pEGFP-C1质粒为模板，以EGFP-F/EGFP-R为引物通过PCR扩增EGFP基因片段；

C.将片段1与EGFP基因片段进行体外同源重组，得到质粒pSFVCs-EGFP；

所述引物序列如下：

EGFP-F：5’-gtccgaagagtgggatcccATGGTGAGCAAGG-3’；(SEQ ID NO:1)；

EGFP-R：5’-ttcaattaattacccgggcttgtacagctcgtc-3’；(SEQ ID NO:2)。