[发明专利]脂肪SVF细胞制剂及其应用

权利要求书

1.一种细胞制剂，其特征在于：其是通过使SVF细胞混悬于生理盐水中配制成的细胞混悬液。

2.根据权利要求1的细胞制剂，其特征在于：其中细胞浓度为1×10⁶～10×10⁶个细胞/ml。

3.根据权利要求1所述的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：所包括如下步骤：

步骤一、脂肪组织的处理：将脂肪组织放置于离心管中，用组织清洗液洗涤脂肪去除血液，所述的组织清洗液是含1％双抗的生理盐水。

步骤二、混合酶消化及终止：将上一步骤所得脂肪组织加入等体积混合酶消化液中混匀，摇床振荡消化，加入胰酶消化，消化结束后，向组织液中添加FBS。

步骤三、收集原代细胞：向上一步骤所得组织液中添加组织清洗液混匀，过滤器过滤收集细胞液；反复两次后，两次的滤液合并至离心管中离心；移去上清，加适量组织清洗液重悬并补充至50ml，离心；移去上清，细胞沉淀加无血清培养基重悬至30ml，滤网过滤后，无血清培养基重冲洗滤网，得细胞悬液作为原代细胞。

步骤四、原代细胞冻存：上一步骤所得细胞悬液离心，留取细胞沉淀及下液，重悬后缓缓加入冻存液，边加边摇匀；将所得细胞悬液分装至9只冻存管中，使用程序降温仪器程序降温，再将细胞转入液氮存储罐中冻存。

4.根据权利要求3的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤二中，所述混合酶消化液包括PBS溶液、一型胶原酶和DNA I型酶。

5.根据权利要求3的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤三中，所述无血清培养基为通用无血清培养基加入血清替代品及谷氨酰胺。

6.根据权利要求3的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤四中，所述冻存液的配方为：90％的KnockOut^TM血清替代物和10％的二甲基亚砜。

7.根据权利要求3的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：针对步骤三所得SVF细胞，检测以下项目的至少两项：细胞活性、细胞污染、传染病；检测之后建立包含以上信息的原代细胞的数据库，并使该数据库与步骤四的冻存细胞进行关联。

8.根据权利要求7的一种细胞制剂的制备方法，其特征在于：所述细胞活性检测是利用台盼蓝染色法或使用AO/PI染料计数冻存前后活细胞的数目；

所述细胞污染检测利用少量细胞培养，检测细胞是否受到真菌和细菌的污染；

所述细胞污染检测是利用病原学方法，检测细胞是否受到选自下列的一项或多项的感染：乙肝两对半、丙肝、艾滋病毒、巨细胞病毒、EB病毒和梅毒；

所述SVF细胞是经程序降温过程冻存于液氮中；

所述数据库中包括与所保存的细胞所有相关的数据，包括但不限于：细胞的生物学特性检测结果、多向分化潜能鉴定结果。

9.权利要求1～2任一项所述细胞制剂的应用，其特征在于：所述细胞制剂应用于制作预防心肌梗死的药物。