[发明专利]脂肪SVF细胞制剂及其应用

说明书

本发明公开了脂肪SVF细胞制剂及其应用，涉及使用脂肪血管基质组分(SVF)治疗心肌梗死的方法和细胞制剂，具体的，本发明一方面涉及一种细胞制剂，其是通过使SVF细胞混悬于生理盐水中配制成的细胞混悬液，该细胞制剂是通过包括如下步骤的方法制得的：将SVF细胞转移至离心管中，离心，弃上清，加入生理盐水重悬，制得细胞制剂；所述SVF细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：脂肪组织的处理，酶消化及终止，收集SVF细胞，原代细胞冻存，细胞检测、冻存及与数据库关联；本发明制得的细胞制剂在治疗心肌梗死方面呈现优异的生物学效应。

技术领域

本发明涉及脂肪SVF细胞制剂领域，具体为脂肪SVF细胞制剂及其应用。

背景技术

SVF是stromal vascular fraction cells(基质血管成分细胞)的缩写，是从脂肪组织提取出来的多种细胞的混合体，含有多种具有修复功能的细胞以及细胞因子混合物形成的细胞群。

脂肪组织因其在能量调控、炎症反应和免疫应答方面的作用已被认为是一个内分泌器官，此外，它还是具有多向分化潜能的多功能细胞的来源之一，而这种多功能细胞就存在于脂肪组织的血管基质部分中，正因为SVF易于从脂肪组织中提取并含有丰富的、可塑性极强的脂肪组织来源的间充质干细胞，这使得掲示SVF的细胞成分及阐明其相应的生物学功能显得意义深远，比如SVF细胞在治疗心肌梗死方面呈现优异的生物学效应，但是SVF在进行提取时，采取酶解、过滤和离心的方式得到提取细胞，但是提取使用的消化酶单一，分解效果差，消化酶用量较大，影响提取纯度，鉴于此，我们提出一种脂肪SVF细胞制剂及其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供脂肪SVF细胞制剂及其应用，以解决上述背景技术中提出的提取使用的消化酶单一，分解效果差，消化酶用量较大，影响提取纯度的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种细胞制剂，其是通过使SVF细胞混悬于生理盐水中配制成的细胞混悬液。

作为优选技术方案：根据权利要求1的细胞制剂，其中细胞浓度为1～10×106个细胞/ml。

作为优选技术方案：细胞制剂是通过包括如下步骤的方法制得的：将SVF细胞转移至离心管中，离心，弃上清，加入生理盐水重悬，制得细胞制剂。

作为优选技术方案：所述SVF细胞是通过包括如下步骤的方法制备得到的：

步骤一、脂肪组织的处理：将脂肪组织放置于无菌的50ml离心管中，用组织清洗液洗涤去除脂肪残余血液。其中，所述的组织清洗液是含1％双抗的生理盐水或磷酸缓冲溶液(PBS)。

步骤二、混合酶消化及终止：将清洗后的脂肪组织加入37℃预热的等体积混合酶消化液中充分混匀后，摇床37℃、100rpm振荡消化30-60min，再加入2-10ml的0.05％胰酶消化，消化结束后，向组织液中添加2ml的FBS以终止消化；其中，所述的混合酶消化液为以下组成PBS溶液、一型胶原酶、DNA I型酶。例如，50ml混合消化酶含49-49.5mlPBS溶液，20-60mg一型胶原酶、0.5ml-1ml DNA I型酶。

步骤三、收集原代细胞：向上一步骤所得组织液中添加50ml组织清洗液，混匀，100μm滤器过滤，收集细胞液；如此反复两次洗涤消化后的组织，两次的滤液合并至离心管中，1000-1500rpm离心8-10min(加速度9，减速度7)；移去上清，加适量组织清洗液重悬并补充至50ml，1000-1500rpm离心8-10min(加速度9，减速度7)；移去上清，细胞沉淀加无血清培养基重悬至30ml，70um滤网过滤后，再用10ml的无血清培养基重冲洗滤网，得40ml细胞悬液，作为原代细胞；其中无血清培养基为市售的500ml通用无血清培养基加入血清替代品及谷氨酰胺。