[发明专利]一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒

说明书

本发明公开了一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒。筛选方法包括：使用能够结合免疫球蛋白(Ig)的物质，分别从第一批健康样本血清和患病样本血清中纯化出Ig复合物；将与Ig相结合的蛋白进行蛋白质谱测序分析，比较健康样本与患病样本的差异，找到只出现在患病样本中的差异蛋白，即为该疾病相关潜在标志物；最后，再进一步验证该潜在标志物：使用第二批健康样本和患病样本的血清(扩大病例)，纯化获得Ig复合物，利用差异蛋白的特异性抗体进行进一步鉴定。该方法先从血清中获得Ig复合物(而不是全血清)，再将与Ig相结合的蛋白进行蛋白质谱测序联合特异性抗体分析，能够快速有效地筛选出疾病相关标志物。

本申请是申请日2021年11月11日，申请号202111329614.0，发明创造名称“一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒”的分案申请。

技术领域

本发明涉及分子生物学与免疫学技术领域，具体涉及一种疾病相关标志物的筛选方法、应用及试剂盒。

背景技术

生物标志物(Biomarker)是指一种具有可客观检测和评价的特性，可作为正常生物学过程、病理过程或治疗干预药理学反应的指示因子的生物体内物质。在疾病的诊断和治疗研究中，寻找和发现有价值的生物标志物已经成为当前医学领域的研究热点。

公开号CN108956791A的专利公开了一种大规模筛选蛋白质生物标志物的方法：将生物组织对照样本和参考样本(病理样本)匀浆、裂解；裂解液进行酶解、除盐等操作；用LC-MS/MS 液质联用的方式进行蛋白质鉴定；通过比较质谱分析次数或质谱峰强度，分析样品蛋白的丰度变化，以MS1为基础，计算每个肽段的信号强度在LC-MS上的积分，以MS2的鉴定结果为定量基础，大规模对数据进行修正；通过修正的数据分析结果筛选出显著上调或下调的蛋白质生物标志物。

公开号CN111999403A的专利公开了一种瓦斯爆炸血清标志物筛选方法，以无创大鼠和瓦斯爆炸肺损伤大鼠血清样本进行LC-MS检测，采用LC-MS血清代谢组学技术进行分析，构建模型，利用模型进行数据处理，从候选代谢产物中筛选肺损伤模型生物标志物。

目前常用的筛选疾病相关特异性标志物的研究，普遍采用全基因组数据或者基因表达数据、全血清蛋白数据等作为分析基础。以新冠肺炎为例，目前通过蛋白质谱技术，已经揭示了重症COVID-19患者血清中蛋白质和代谢物的特征变化，鉴定了一些可能具有应用潜质的标志分子。然而，几乎所有寻找特异性生物标志物的研究都是利用COVID-19的全血清蛋白。对于蛋白质谱技术来说，由于其所用样品量少、而特异性标志物在血清或血浆含量却较低，显然，对于所需样本量少而为“优势”的蛋白质谱技术而言可谓是“大海捞针”，即要从这些目标分析物中筛选出有意义的标志物并非易事。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的上述问题，提供一种疾病相关潜在生物标志物的筛选方法、应用及试剂盒，该方法能够快速筛选出有意义的标志物，为疾病的诊断和治疗提供靶标基础。

第一方面，本发明提供了一种疾病相关潜在标志物的筛选方法，包括：

(1)使用能够结合Ig(免疫球蛋白)的物质，分别从第一批健康样本血清和患病样本血清中纯化出Ig复合物；

(2)对Ig复合物进行质谱分析和/或糖谱分析，比较健康样本与患病样本的分析结果，找到只高频出现在患病样本的Ig复合物中与Ig相结合的差异蛋白，和/或只高频出现在患病样本的Ig复合物中的差异糖基，该差异蛋白和/或差异糖基即为该疾病相关的潜在标志物；

(3)进一步扩大健康样本和患病样本的数量，采用与步骤(1)相同的方法纯化获得Ig 复合物，验证差异蛋白和/或差异糖基。

可选或优选的，上述方法中，所述验证的方法如下：