[发明专利]用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途

说明书

本发明提出了一种用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途，属于医疗技术领域。所述用于癌细胞原代培养的添加剂，其特征在于，包括霍乱毒素、R‑spondin、A‑83‑01和Y‑27632中的至少三种。用于癌细胞原代培养的培养基包括完全DMEM培养基和F12营养混合物；所述F12营养混合物包括霍乱毒素、R‑spondin、A‑83‑01和Y‑27632中的至少三种。本发明通过优化筛选培养方法和培养基配方，研制出了一种不依赖于滋养层细胞的培养体系，成功率高，从而大大降低了培养基的大规模制备难度，同时也更易于建立稳定的质量控制体系，从而实现商业化。

技术领域

本发明涉及检测试剂盒技术领域，具体涉及用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途。

背景技术

原代肿瘤细胞因刚从组织中分离，生物学特性未发生很大变化，可以很好的保持原始状态的肿瘤生物学特性。由于遗传背景差异，不同的患者发病的机制及治疗敏感性均存在个体性差异，因此，自体肿瘤细胞原代培养是研究患者肿瘤发病机制及肿瘤细胞分子生物学特性的重要手段。

人工模拟肿瘤细胞在体外的生存环境是肿瘤细胞原代培养的基础，肿瘤细胞的生存环境除需无菌、温度、pH值、湿度等环境因素外，最主要的是培养基，它给细胞提供生长所需的营养物质。目前细胞进行原代培养及建系最常用的是含10％的胎牛血清的基础培养液进行培养。但是应用该肿瘤细胞培养技术培养原代肿瘤细胞，成功率非常低。这是因为含血清培养基成分不明确；而且使用血清有可能促进某些细胞的生长(如成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(如表皮细胞)，血清中含一些对细胞产生毒性的物质，影响细胞生长，甚至造成细胞死亡。在血清取材过程中还有可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或实验结果不可靠性。血清还存在批间差异较大，性能不稳定等缺点。无血清培养更利于细胞生长，而且批间次一致性高，可消除来自血清的不均一性，增加确定性，也不存在动物伦理方面的争议。

近些年发展的一些原代肿瘤细胞无血清培养基使原代肿瘤细胞培养的成功率有所提高。但现有的无血清培养基在培养原代肿瘤细胞过程中，仍然需要在培养体系中引入异种来源的经过辐照处理的滋养层细胞，这使得培养体系的建立过于繁琐，不方便操作，同时也对试剂盒的标准化和规模化生产提出挑战，实现量产困难较大，同时不能有效地抑制和去除原代肿瘤细胞中的主要混杂成分成纤维细胞。

发明内容

本发明的目的在于提出用于癌细胞原代培养的添加剂及其培养基和用途，通过优化筛选培养方法和培养基配方，研制出了一种可以不依赖于滋养层细胞和/或血清的培养体系，该培养体系可以实现如下目的中的一个或多个：成功率高；降低了培养基的大规模制备难度；易于建立稳定的质量控制体系，进而实现商业化。

为实现上述发明目的中的一个或多个，本发明的提供如下技术方案。

本发明提供一种用于癌细胞原代培养的添加剂，包括霍乱毒素、R-spondin(例如为R-spondin 1,R-spondin 2,R-spondin 3和R-spondin 4)、A-83-01和Y-27632中的至少三种；示例性地为霍乱毒素、R-spondin、Y-27632，质量比为1：(2-3)：(2-5)；霍乱毒素、R-spondin、A-83-01，质量比为1：(2-3)：(1-4)；霍乱毒素、A-83-01和Y-27632，质量比为1：(1-4)：(2-5)；R-spondin、A-83-01和Y-27632，质量比为1：(2-4)：(1-3)。

优选为霍乱毒素、R-spondin、Y-27632，或霍乱毒素、A-83-01和Y-27632。

作为本发明的进一步改进，包括霍乱毒素、R-spondin、A-83-01和Y-27632。

优选地，所述霍乱毒素、R-spondin、A-83-01和Y-27632的质量比为1：(2-3)：(1-4)：(2-5)。