[发明专利]紫杉醇相关物质检测试剂、检测方法及应用

权利要求书

1.紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物检测试剂，其特征在于，

所述试剂包括内标标准品、校准品和质控品；

所述内标标准品包括紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的同位素内标物的甲醇溶液；

所述校准品包括至少3个浓度稀释梯度的紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的甲醇溶液；

所述质控品包括至少1个浓度稀释梯度的紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的甲醇溶液；

所述紫杉醇类似物包括多西他赛、7-EPI紫杉醇，所述紫杉醇代谢产物包括6α-3'-对-二羟基紫杉醇、6α-羟基紫杉醇和3'-对-羟基紫杉醇。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述内标标准品中紫杉醇、多西他赛、7-EPI紫杉醇、6α-3'-对-二羟基紫杉醇、6α-羟基紫杉醇和3'-对-羟基紫杉醇的浓度比为2:2:2:1:1:1。

3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，所述校准品的浓度稀释梯度为7个，其中紫杉醇的浓度范围为100～10000ng/mL；

所述质控品的浓度稀释梯度为3个，其中紫杉醇的浓度范围为300～8000μg/mL；

所述内标标准品中紫杉醇的浓度为0.2ng/mL。

4.紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括，权利要求1～3任一项所述的校准品和质控品中的各个试剂与血浆基质混合后冻干得到的冻干粉。

5.权利要求4所述试剂盒中各个试剂的冻干粉的制备方法，其特征在于，所述方法包括，向权利要求1～3任一项所述的校准品和质控品中加入血浆基质得到血浆校准品和血浆质控品，而后经冻干得到冻干粉；

优选地，所述血浆基质为含有10g/mL海藻糖的血浆；

优选地，所述血浆校准品中紫杉醇的浓度范围为10～1000ng/mL；

优选地，所述血浆质控品中紫杉醇的浓度范围为30～800ng/mL。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述冻干依次包括预冻、升华和解析干燥步骤；

所述预冻温度为-50～-60℃，优选为-55℃，预冻设定时间为1min～10min，优选为5min，预冻持续时间为170min～200min，优选为180min；

所述升华为梯度升华，升华温度范围为-45℃～-10℃，梯度升华的真空度为0.2mbar；

所述解析干燥为梯度解析干燥，解析干燥温度范围为0℃～25℃。

7.权利要求1～3任一项所述试剂或权利要求4所述试剂盒在药物开发、药物筛选或科学研究中的应用；

所述药物含有紫杉醇、紫杉醇类似物或紫杉醇代谢产物中的至少一种；

优选地，所述药物包括紫杉醇、多西他赛、7-EPI紫杉醇、6α-3'-对-二羟基紫杉醇、6α-羟基紫杉醇和3'-对-羟基紫杉醇。

8.紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物检测方法，其特征在于，所述检测方法包括，使用权利要求1～3任一项所述试剂，或将权利要求4所述试剂盒中冻干粉溶于水中得到的复溶试剂，采用液相色谱串联质谱方法对待测样本中的紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物进行检测。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述质谱采用电喷雾离子源，离子源参数为气帘气流速15～20psi，优选为20psi，喷撞气流速5～10psi，优选为9psi，离子化电压5000～6000V，优选为5500V，温度为400～450℃，优选为450℃，喷雾气和辅助加热气流速为40～45psi；

所述液相色谱参数为流动相流速为0.3～0.5mL/min，优选为0.35mL/min，水相含有2mM乙酸铵和体积分数为0.1％甲酸，有机相为甲醇，柱温为30～50℃，优选为40℃，进样温度为5～15℃，优选为10℃，色谱柱为Thermo ACCUCORETM aQ。

10.根据权利要求8或9所述的检测方法，其特征在于，所述待测样本包括紫杉醇、多西他赛、7-EPI紫杉醇、6α-3'-对-二羟基紫杉醇、6α-羟基紫杉醇和3'-对-羟基紫杉醇；

优选地，所述待测样本包括血浆或血清。