[发明专利]紫杉醇相关物质检测试剂、检测方法及应用

说明书

本发明涉及制药技术领域，尤其是涉及一种紫杉醇相关物质检测试剂、检测方法及应用。本发明了提供的紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物检测试剂包括内标标准品、校准品和质控品；所述紫杉醇代谢产物包括6α‑3'‑对‑二羟基紫杉醇、6α‑羟基紫杉醇和3'‑对‑羟基紫杉醇。本发明提供的检测试剂和试剂盒用于紫杉醇相关物质检测时，采用稳定性同位素内标，利用一步蛋白沉淀法进行样本的制备，减少样品预处理过程，操作简单、省时、省力，能够快速、精确定量紫杉醇及其代谢物，可为紫杉醇的质谱定性和定量分析以及药物代谢研究提供重要参考。

技术领域

本发明涉及制药技术领域，尤其是涉及一种紫杉醇相关物质检测试剂、检测方法及应用。

背景技术

紫杉醇是一种抗微血管细胞药物，被广泛应用于乳腺癌、卵巢癌、肺癌等恶性肿瘤。多西他赛又名多西紫杉醇，是在通过紫杉醇结构改造而来，抗癌效果为紫杉醇1.3～2倍。紫杉醇在人体内细胞色素代谢酶CYP3A4和CYP2C8的作用下，代谢为6α-羟基紫杉醇、3'-对-羟基紫杉醇、6α-3’-p-二羟基紫杉醇。6α-羟基紫杉醇经过一系列的活性测试显示，抗癌效果至少为紫杉醇的10倍，并且发现6α-羟基紫杉醇细胞毒性仅为紫杉醇的1/30，具有良好的开发前景。7-表紫杉醇是一种C-7异构化的紫杉醇异构体。7-表紫杉醇最早由Huang等从日本红豆杉树皮中分离得到，是有抗肿瘤活性的紫杉二萜类化合物，其对VA-13、HepG2等肿瘤细胞毒性与紫杉醇相当。

研究表明，紫杉醇的血药浓度大于0.05μmoL^-1的持续时间与其疗效和浓度相关，多西他赛的血药浓度与药物的应答率和毒性相关，因此，紫杉醇和多西他赛的血药浓度可预测化疗毒性及疗效。药代动力学指导的剂量个体化可能产生更好的治疗结果，减少严重的副作用，并最大限度地提高疗效。研究发现CYP3A4和CYP2C8两种酶的活性在个体之间存在差异，导致紫杉醇的药代动力学发生变化，紫杉醇与其代谢物间差向异构相互作用的存在可能导致紫杉醇复杂的药代动力学特征。基于上述因素测定紫杉醇、紫杉醇类似物及其代谢物在血液、组织及脏器中的分布，成为衡量药物的有效性和安全性的重要指标，在避免药物毒性以及新药的研究与开发具有重要的意义。

目前，已有多种方法测量血浆中紫杉醇、紫杉醇类似物及其代谢物的浓度，尽管已经开发了许多更灵敏的紫杉醇质量分光光度法，只有少数用于测定血浆中紫杉醇及其代谢物，这些方法具有灵敏度和选择性有限的缺点。有研究通过液相色谱法和紫外可见分光光度法测定了血浆中的紫杉醇及其代谢物。然而，这些方法需要使用昂贵的固相萃取盒或大量(0.4～1.0mL)样品，操作程序复杂。也有研究采用乙醚氯仿混合溶剂液液萃取对紫杉醇及其两种代谢物6-羟基紫杉醇和p-3-羟基紫杉醇进行制样，此方法操作工序繁杂，操作费时，有机溶剂消耗量大，难以从水中提取高水溶性组分，易发生乳化现象。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种用于检测紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的试剂及含有该试剂的试剂盒，以解决现有技术中试剂昂贵、操作复杂费时，以及检测过程易乳化的技术问题。

本发明还提供了上述试剂或试剂盒在药物开发、药物筛选或科学研究中的应用，以及应用上述试剂检测紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的方法，以期进一步提高现有液相色谱串联质谱方法对紫杉醇及相关物质的检测效果，为药物开发或筛选提供精准指导。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明了提供了紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物检测试剂，所述试剂包括内标标准品、校准品和质控品；

所述内标标准品包括紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的同位素内标物的甲醇溶液；

所述校准品包括至少3个浓度稀释梯度的紫杉醇、紫杉醇类似物及紫杉醇代谢产物的甲醇溶液；