[发明专利]一种山羊痘病毒单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种山羊痘病毒单克隆抗体及其应用。一种具有免疫原性的蛋白rGP32Δ，所述蛋白rGP32Δ的编码序列如SEQ ID No.1的第4～717位所示；所述的蛋白rGP32Δ的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第2～239位所示。本发明利用灭活的山羊痘病毒作为免疫原进免疫小鼠，并通过原核系统获得了LSDV免疫原性较强的P32蛋白的截断蛋白rLP32Δ，利用rLP32Δ用进行LSDV单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选以及后续ELISA检测方法的建立，从而在最大程度上保持病毒抗原天然构象的同时，极大地避免了不必要的生物安全隐患。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种山羊痘病毒单克隆抗体及其应用。

背景技术

山羊痘病毒(goat pox virus，GTPV)属于痘病毒科(poxviridae)、山羊痘病毒属(Capripoxvirus)，可感染绵羊阳和山羊引起恶性痘病，包括肯尼亚绵羊阳痘、山羊痘、印度羊皮炎等。其中细毛羊、羔羊最易感该病毒，病羊出现发热、无毛或少毛部位皮肤黏膜发生丘疹和疱疹、淋巴结肿大、皮肤水肿、病羊消瘦、产乳量大幅度降低等临床表现，从而严重降低了山羊的生产性能及羊毛和羊皮制品的质量，成年发病羊死亡率可高达42.06％，病羔羊死亡率高达100％，一旦发病可造成巨大经济损失。

本病在世界许多地区已有发生，特别是非洲北部、中东和亚洲的部分国家流行较为严重，我国周边国家如尼泊尔、俄罗斯、印度等也均有本病流行。而我国境内的江苏、陕西、福建以及四川、云南、广西等地也有该病的发生，主要是由于养羊业发展过程中，品种的引进、流动引起了山羊痘的传播和流行。

此病为OIE规定的A类疾病，我国将其列为国家I类动物疫病。此外山羊痘病毒还可感染人，重庆市彭水县发生一例具有特异性病原学诊断依据人感染羊痘病例，其他地区还发生过几例人感染羊痘的报道，所有病例均有与病羊的接触史，为接触性感染，因此山羊痘病毒检测方法的研究具有重要的公共卫生学意义。

虽然我国有商品化的山羊痘的疫苗，但由于目前缺少有效的GTPV抗体检测试剂盒，导致相关疫苗研制过程中山羊痘抗体阴性动物筛选较为困难，且靶动物的免疫效果评价只能采取涉及到活GTPV的病毒中和试验(VNT)，存在较大的生物安全隐患。为此，急切需要建立快速、灵敏、特异的GTPV抗体ELISA检测方法。

现有技术中已经公开了山羊痘病毒的P32蛋白及其抗原性，但获得的P32蛋白疏水性较强，影响了其生物学应用。现有技术获取的P32蛋白多以包涵体的形式存在，可溶性的蛋白量较少，而且对表达产物的处理过程复杂，表达量也偏低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组的GTPV的P32蛋白截断蛋白rGP32Δ，并提供一种分泌抗GTPV的杂交瘤细胞株，并利用该杂交瘤细胞株制备单克隆抗体，进一步建立GTPV的阻断ELISA检测方法，从而为GTPV疫苗的研发以及效力检验替代方法的研制提供技术支持。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下。

第一方面，本发明提供一种具有免疫原性的蛋白rGP32Δ，所述蛋白rGP32Δ的编码序列如SEQ ID No.1的第4～717位所示；

在一个具体的实施例中，所述的编码序列是所按照大肠杆菌偏爱密码子对GTPV的P32蛋白的1～238位氨基酸编码序列进行优化，并在C末端引入6×His标签而合成基因片段GGP32Δ。

进一步的，所述的蛋白rGP32Δ的氨基酸序列如SEQ ID No.2的第2～239位所示。

在一个具体的实施例中，rGP32Δ蛋白是由重组表达rGP32Δ的宿主细胞大肠杆菌的BL21(DE3)细胞株作为生产菌株制备的，该菌株为大肠埃希氏菌BL322株。

进一步的，所述的蛋白rGP32Δ为可溶性蛋白；