[发明专利]检测粪便中人巨细胞病毒的PCR引物组及其微滴式数字PCR试剂盒

权利要求书

1.一种检测粪便中人巨细胞病毒的PCR引物组，其特征在于：所述PCR引物组由引物对CMV-FR和探针CMV-P1组成，其中，

所述引物对CMV-FR为

上游引物CMV-F1：

5’-GTGATCCATGTGCTTATGACTTTGT-3’，

下游引物CMV-R1：5’-GCCTTGGTCACGGGTGTCT-3’；

所述探针CMV-P1：5’-ATCATGTGTTTAGGCCC-3’，且探针CMV-P1的5’端标记有荧光基团，其3’端标记有非荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述检测粪便中人巨细胞病毒的PCR引物组，其特征在于：所述荧光基团为FAM，所述非荧光淬灭基团为MGB。

3.一种检测粪便中人巨细胞病毒的微滴式数字PCR试剂盒，其特征在于：所述PCR试剂盒包括权利要求1所述PCR引物组。

4.根据权利要求3所述微滴式数字PCR试剂盒，其特征在于：所述微滴式数字PCR试剂盒还包括数字PCR缓冲液、微滴生成油、微滴生成卡、96孔板和铝箔热封膜。

5.根据权利要求3或4所述的微滴式数字PCR试剂盒，其特征在于：所述PCR试剂盒还包括内控基因引物组(根据针对编码人核糖核蛋白复合体亚基基因POP4设计得到)，所述内控基因引物组由内控引物对POP4-FR和内控探针POP4-P，其中，

所述内控引物对POP4为包括

上游引物POP4-F：5’-GGCGGTGGTCCTGGAGTACT-3’，

下游引物POP4-R：5’-AGAGGCCTTTGGCTTTCTTCTT-3’；

所述内控探针POP4-P：5’-ACCCGCCACAAGC-3’，且内控探针引物POP4-P的5’端标记有荧光基团。

6.一种权利要求3～5任意一项所述的微滴式数字PCR试剂盒检测人巨细胞病毒核酸的方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

1)处理粪便标本，提取粪便上清游离DNA；

2)配制微滴式数字PCR反应混合液：将所述微滴式数字PCR检测试剂和待测样本DNA模板混合，得到微滴式数字PCR反应混合液；

3)微滴生成：将所述微滴式数字PCR反应混合液和微滴生成油加入微滴生成卡中，置于微滴生成仪中生成微滴；

4)PCR扩增反应：将所述生成的微滴转移到96孔板中，盖上铝箔膜，封膜机进行封膜，封完膜将96孔板放入PCR仪进行PCR扩增反应；

5)读取荧光信号：将扩增后的96孔板置于微滴读取仪中，设置好参数，利用软件直接进行结果读取和分析。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，生成微滴的方法如下：

将微滴式数字PCR反应混合液加入到微滴发生板内，然后在对应的其它孔内加入微滴发生油，再将微滴生成板置入微滴发生卡内，盖上皮套，放入微滴发生仪中自行进行微滴发生。