[发明专利]本氏烟MTA基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法

说明书

本发明公开了一种本氏烟MTA基因在调控植物抗病毒中的应用及转基因植物培育方法，所述病毒为凤果花叶病毒，MTA基因的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过农杆菌转化的方法，将MTA基因导入目的植物中，获得了本氏烟MTA基因过表达植物，获得的本氏烟MTA过表达植物能够显著减轻凤果花叶病毒的侵染。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种抑制凤果花叶病毒侵染的转基因植物。

背景技术

凤果花叶病毒(Pepino mosaic virus,PepMV)属于马铃薯X病毒属病毒。1974年首次在秘鲁凤果中分离得到该病毒。在此之后，欧洲、北美、南美、非洲、亚洲及大洋洲地区都有发现该病毒，现已成为温室番茄的重要病害。PepMV主要侵染番茄、茄子、马铃薯等茄科蔬菜，也能侵染苋属植物、金盏花、南茼蒿、田旋花、小花锦葵、光烟草、龙葵、苦苣菜、墙生藜、白酒草、野生剑生菜、罗勒、酸模属植物、水蒜芥、蒲公英等植物。

PepMV侵染番茄后，可导致番茄果实斑驳、变色、裂果、叶片花叶、扭曲、起泡、叶茎维管组织坏死，甚至全株死亡，严重影响番茄的产量和品质。PepMV具有高度传染性，可以通过污染的工具、手和衣物以及植物间直接接触等方式进行传播，一旦发生将很难遏制。目前，该病毒已在我国云南地区普遍发生。

农业卫生预防是生产中控制PepMV的重要措施。但是由于该病毒具有高度传染性，这就使得农业卫生措施预防病毒成为挑战，尤其是在密集的大田和保护地。交叉保护是预防病毒的另一重要手段。但是由于该病毒基因型分化等原因，效果有限，甚至还会出现病毒症状更重的情况。此外，生产上缺少抗PepMV的植物遗传材料。因此，目前还没有有效控制PepMV的方法。

发明内容

本发明的第一目的是提供一种本氏烟MTA基因在调控植物抗病毒中的应用。

本发明的第二目的是提供一种本氏烟MTA高表达植物的培育方法。

本发明发现了本氏烟中MTA基因是一个抗病基因，通过农杆菌转化的方法，将MTA基因导入目的植物中，获得的本氏烟MTA高表达植物能够显著减轻PepMV的侵染，有效控制该病毒的危害。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案具体如下：

本氏烟MTA基因在调控植物抗病毒中的应用，其中，所述病毒为凤果花叶病毒。所述MTA基因的转录本序列如SEQ ID NO:1所示。

具体的，是通过农杆菌转化的方法，将MTA基因导入目的植物中，获得的本氏烟MTA高表达植物能够显著减轻凤果花叶病毒的侵染，抑制凤果花叶病毒造成的病害。

一种抗凤果花叶病毒的MTA转基因植物的培育方法：通过农杆菌转化的方法，将MTA基因导入目的植物中，获得本氏烟MTA基因高表达植物。

具体包括以下步骤：

(1)本氏烟草叶片取样，Trizol法抽提RNA，使用oligo(dT)₁₈

(5'-TTTTTTTTTTTTTTTTTT-3')引物反转录获得cDNA；

(2)使用引物对NbMTA-F与NbMTA-R，如SEQ ID NO:2-3所示，以cDNA为模板进行PCR扩增，克隆得到NbMTA，

NbMTA-F：ATGCCAACTTTGTACAAAAAAGC；

NbMTA-R：TGCAAGGGCTGGATGGCAAATAATG；

(3)将NbMTA构建到带有GFP荧光标签的载体上，获得GFP-NbMTA重组质粒；