[发明专利]分子标记引物对、耐旱型甘蓝型油菜鉴定方法和育种方法

权利要求书

1.一种用于鉴定甘蓝型油菜耐旱性的分子标记引物组，其特征在于，所述分子标记引物组包括dCAPS标记引物对，碱基序列如下：

SWU_YA7dCAPSF：CTACCCATATCCAGATCCTTACTACAGACGTAC；

SWU_YA7dCAPSR：CTTTGCTCTGGATTGCCTACGTCTCAGTA；

还包括基于巢式PCR的位点特异性标记的外引物对和内引物对；

所述外引物对的碱基序列如下：

正向外引物SWU_YA7F：GTAGAGGTAGACCCGTAGAAAGCCG；

反向外引物SWU_YA7R：GACTCATGAGCAGCTTTAAATGTCC；

所述内引物对包括第一内引物对和第二内引物对；

第一内引物对碱基序列如下：

第一正向内引物SWU_H3F：GTAGCGGGTAGAGGTAGAC；

第一反向内引物SWU_H3R：CAGAATTATCAAAATCCAAT；

第二内引物对碱基序列如下：

第二正向内引物SWU_H4F：GTAGCGGGTAGAGGTAGAC；

第二反向内引物SWU_H4R：CAGAATTATCAAAATCCCAC。

2.一种基于权利要求1所述分子标记引物组鉴定甘蓝型油菜品种耐旱性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.1 提取一个或多个甘蓝型油菜品种的植株DNA；

S1.2 使用权利要求1所述dCAPS标记引物对，进行第一PCR扩增，得第一PCR扩增产物；

S1.3 用限制性内切酶酶切所述第一PCR扩增产物，进行酶切扩增多态性分析；

S1.4 将S1.3酶切所得片段进行第一电泳检测；

第一电泳检测条带以高带呈现的甘蓝型油菜品种为耐旱品种；

第一电泳检测条带以低带呈现的甘蓝型油菜品种为不耐旱品种；

S2.1 步骤S1.4后提取耐旱品种DNA；或者，重新提取一个或多个甘蓝型油菜品种的植株DNA，

S2.2 利用所述外引物对对所述S2.1提取的DNA进行第二PCR扩增，得第二PCR扩增产物；

S2.3 取第二PCR扩增产物，加ddH₂O稀释后作为第三PCR扩增模板，利用所述内引物对对所述模板进行第三PCR扩增，得第三PCR扩增产物；

S2.4 将所述第三PCR扩增产物进行第二电泳检测，检查第二电泳条带；

经S1鉴定为耐旱品种，且检查S2.4第二电泳条带：

第一内引物对无条带且第二内引物对有条带，甘蓝型油菜品种为耐旱品种；

第一内引物对有条带且第二内引物对无条带，甘蓝型油菜品种为不耐旱或低抗品种。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述限制性内切酶为限制性内切酶Pfl23II。

4.一种耐旱型甘蓝型油菜育种方法，其特征在于，利用权利要求2所述方法选择出BnaA9.NF-YA7基因中的SNP基因型为胞嘧啶（C）同时启动子中靠近翻译起始位点的CCAAT-box缺失的甘蓝型油菜，即为筛选出的目标株系，对所述目标株系执行回交转育程序。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，利用所述分子标记引物组在甘蓝型油菜苗期鉴定植株的基因型，选取纯合子基因型耐旱型或强耐旱型植株，执行回交转育程序。