[发明专利]分子标记引物对、耐旱型甘蓝型油菜鉴定方法和育种方法

说明书

本发明公开一种分子标记引物对、耐旱型甘蓝型油菜鉴定方法和育种方法，所述分子标记引物对为dCAPS标记引物对，和/或，基于巢式PCR的位点特异性标记的外引物对和内引物对。利用前述分子标记引物对对甘蓝型油菜的DNA进行PCR扩增，电泳检测，根据电泳条带的显示结果鉴定甘蓝型油菜品种耐旱性，将鉴定出的纯合耐旱型甘蓝型油菜用于油菜新品种育种。本发明基于全基因组关联分析、单倍型分析、启动子截短和GUS活性检测技术，开发靶向明确的位点特异性标记和dCAPS标记，本发明提供的巢式PCR标记特异性高，可区分出耐旱性更强的Hap4材料。

技术领域

本发明属于作物遗传育种领域，涉及筛选甘蓝型油菜耐旱材料的分子标记组合，以及使用所述分子标记组合筛选甘蓝型油菜耐旱材料的应用，以及利用所述标记组合筛选目标株系进行育种的方法。

背景技术

油菜是世界上最重要的油料作物之一，我国是世界上第一大油菜生产国，每年种植面积在7百万公顷以上，产量和面积约占世界30％以上。作为主要的食用植物油来源和重要的饲用蛋白来源，油菜生产在保障我国食用植物油供应中起着重要作用。我国种植的油菜主要为甘蓝型油菜，其株体较大，生育期长，整个生育期对水分需求量大。干旱胁迫是全球农业生产中最严重的一种环境胁迫，它主要通过影响油菜的播种期、出苗期、开花期来制约油菜的生长情况和产量。

作物抗旱性属多基因控制的复杂数量性状，抗旱性表型鉴定指标难以确定，且易受环境因素影响。

通过传统育种手段提高作物耐旱性，其周期长、进展慢，效果不显著。利用分子育种手段可以大大加速育种进程，提高育种效率。

现有技术中，油菜抗旱QTL定位研究取得了一定的进展，大量抗旱相关的重要关键基因已经被鉴定和克隆，并通过基因工程手段成功转入甘蓝型油菜中，取得了预期的效果。因为普通公众对转基因食品仍然存在疑虑，所以转基因品种并没有在大田和生产实践中得到应用和推广。

因此，利用甘蓝型油菜丰富的遗传资源，挖掘耐旱性相关的分子标记，通过分子标记辅助选择来改良作物的抗旱性，有助于培育抗旱新品种。

在实现本发明过程中，发明人发现现有技术中至少存在如下问题中的一个技术问题：

1、甘蓝型油菜抗旱分子机制和育种研究进展缓慢，远远落后于水稻、玉米等其他作物。作为异源多倍体，甘蓝型油菜基因组大、杂合度高、基因组内具有高度重复序列。目前公开报道的与耐旱性相关的分子标记较少，且这些标记大部分不能直接靶向目标基因，基因的分离重组易造成标记信息的丢失，导致对目标性状的选择造成一定的困难。

2、甘蓝型油菜A亚基因组和C亚基因组高度同源，常规分子标记难以区分扩增产物的来源。

3、发明人在开发出了能够鉴定出耐旱材料的dCAPS标记的基础上，进一步研究发现所述dCAPS标记不能区分Hap4和Hap1材料。

发明内容

鉴于此，本发明目的在于提供一种能够鉴定出甘蓝型油菜品种中耐旱型材料的分子标记引物对，该分析标记引物对特异性高。

本发明的第二目的在于提供一种鉴定甘蓝型油菜品种耐旱性的方法。

本发明的第三目的在于提供一种耐旱型甘蓝型油菜育种方法。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是，提供一种用于鉴定甘蓝型油菜耐旱性的分子标记引物对，所述分子标记引物对为dCAPS标记引物对，碱基序列如下：

SWU_YA7dCAPSF：CTACCCATATCCAGATCCTTACTACAGACGTAC；

SWU_YA7dCAPSR：CTTTGCTCTGGATTGCCTACGTCTCAGTA。

和/或，还包括基于巢式PCR的位点特异性标记的外引物对和内引物对。