[发明专利]二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建

权利要求书

1.二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于，步骤如下：

1)无菌保存的供体马铃薯材料CIP149的茎尖在MS30基础培养基上培养，培养温度为23±2℃，湿度为30％-40％，光照强度2000-2500lx，16h光照8h黑暗交替培养；取无生长点的茎段为外植体平铺在P-MS20平板培养基上预培养2天，每个培养皿100个外植体；

2)活化根癌农杆菌GV3101阳性转化菌株，摇菌至OD约0.5，用液体MS20悬浮菌体后，加入AS，浸染上所述预培养的外植体10min，弃菌液，放置于灭菌滤纸上吸干菌液，然后将外植体平铺在C-MS20平板培养基上28℃培养箱黑暗共培养2天，给农杆菌提供一个适宜的生长环境且能更容易的侵染茎段；

3)经两天共培养的外植体均匀更换至CIM培养基上进行诱导愈伤处理，每个皿放置20个茎段，茎段不能放多，切好的茎段在培养基生长过程中会分泌毒素来保护自身不受伤害，茎段放的太多挨的太近毒素会影响茎段的生长；

4)经2周第3步处理的外植体均匀更换至愈伤诱导培养基SIM上进行诱芽处理，之后每两周更换一次新的SIM培养基直至出芽。

2.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤1)中，瓶苗平均每瓶11-13个茎尖扩繁。

3.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤1)中，选取的外植体颜色绿，植物组织紧密。

4.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤1)中，基础培养基由如下重量份试剂组成：

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5.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤1)中，茎段预培养基由如下重量份试剂组成：

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6.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤2)中，C-MS20由如下重量份试剂组成：

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7.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤3)中，培养基采用CIM培养基，CIM培养基由如下重量份试剂组成：

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8.根据权利要求1所述的二倍体马铃薯CIP149高效离体再生体系及茎段遗传转化体系的构建，其特征在于：在步骤4)中，SIM培养基由如下重量份试剂组成：

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