[发明专利]样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种样品稀释液，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：

脱脂奶粉5-15％；

胎牛血清5～15％；

余量为PBST水溶液。

2.根据权利要求1所述的样品稀释液，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：

脱脂奶粉5-10％；

胎牛血清5-10％；

余量为PBST水溶液。

3.一种包含如权利要求1～2任一所述样品稀释液的间接ELISA检测试剂盒。

4.番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，包括番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体和样品稀释液，其特征在于，所述番鸭细小病毒VP3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述样品稀释液为如权利要求1～2任一所述的样品稀释液。

5.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：

脱脂奶粉  10％；

胎牛血清  10％；

余量为PBST水溶液。

6.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体的制备方法包括以下步骤：

利用所述番鸭细小病毒VP3蛋白包被载体；

采用封闭液处理所述载体的包被面；

所述番鸭细小病毒VP3蛋白的使用量为0.5～1μg；

所述封闭液为5-10wt％脱脂奶粉。

7.根据权利要求4所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照、阴性对照、酶标二抗、底物缓冲溶液、底物溶液以及终止液。

8.根据权利要求7所述番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，

所述阳性对照为番鸭细小病毒标准阳性血清；

所述阴性对照为番鸭细小病毒标准阴性血清；

所述酶标二抗为HRP标记的兔抗番鸭IgG；

所述底物缓冲溶液为含有过氧化氢的柠檬酸-磷酸氢二钠水溶液，其中过氧化氢的浓度为1.11g/L，柠檬酸的浓度为0.025mol/L，磷酸氢二钠的浓度为0.05mol/L；

所述底物溶液为0.01g的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶于1mL NN'-二甲基乙酰胺制得；

所述终止液为2mol/L的硫酸水溶液。

9.一种检测番鸭细小病毒抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S100：利用权利要求1或2任一所述的样品稀释液稀释待测样品、阳性对照和阴性对照，向番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体的孔内分别加入稀释后的待测样品、阳性对照和阴性对照，并置于37℃孵育1h，孵育结束后，对载体进行清洗并干燥；

S200：向各孔内加入酶标二抗的PBST溶液后，将载体置于37℃下孵育1h，孵育结束后，对载体进行清洗并干燥；

S300：向各孔内加入经底物缓冲溶液稀释后的底物溶液，避光显色5-10分钟后，加入终止液；

S400：利用酶标仪检测各孔的吸收值OD₄₅₀；

S500：根据吸收值OD₄₅₀判断待测样品是否为阳性；

所述待测样品的稀释倍数为50-100。