[发明专利]样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本申请公开了一种样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：5‑15％脱脂奶粉；5～15％胎牛血清；余量为PBST水溶液。本申请的样品稀释液应用于间接ELISA检测试剂盒，能够有效降低待测样品自身背景的影响，提高检测的特异性和灵敏性。本申请通过间接ELISA检测试剂盒构建了检测番鸭细小病毒抗体的方法，该方法特异性好、灵敏度高，能够实现样品的快速检测。

技术领域

本申请涉及病毒抗体检测技术领域，特别是涉及一种样品稀释液、间接ELISA检测试剂盒及其应用。

背景技术

番鸭细小病毒病为由番鸭细小病毒(Muscovy Duck Parvovirus,MDPV)引起的雏番鸭以喘气、腹泻、软脚、胰坏死和出血及纤维素性肠炎为主要特征的急性败血型传染病，因其主要侵害3周龄内雏番鸭，故又称“三周病”。该病传染性极强，发病率和死亡率高，3周龄以内的雏番鸭，发病率为27％-62％，病死率40％-65％；患病鸭痊愈后往往成为僵鸭，给番鸭养殖业造成严重的经济损失。

MDPV属于细小病毒科、细小病毒属，为单链线性DNA病毒。病毒粒子直径20～22nm，为圆形或六角形，无囊膜，呈二十面体对称。基因组长5136bp，由左右两个开放阅读框(OpenReading Frame，ORF)和两端的末端重复序列(Inverted terminal repeats，ITR)组成。在两个ORF之间间隔18bp，左侧ORF编码NS1和NS2两个非结构蛋白，右侧ORF编码结构蛋白，结构蛋白VP1、VP2和VP3基因的起始密码子位置不同，但共用同一终止密码子，即VP1基因含有组成VP2和VP3的全部基因编码序列，其中VP2结构蛋白具有免疫原性，是病毒刺激机体产生保护性抗体的重要蛋白抗原；VP3是主要衣壳蛋白，约占总蛋白的80％，也是蛋白抗原核心结构域。

目前，检测番鸭细小病毒病抗体的方法主要有乳胶凝集法、琼脂扩散法、荧光抗体法、酶联免疫吸附法(ELISA)，其中利用MDPV重组病毒蛋白建立间接ELISA检测试剂盒对于番鸭细小病毒抗体的检测的具有重要的意义，但现有间接EILSA检测试剂盒在应用时易受待测样品背景的影响，导致其对MDPV的特异性变差、灵敏度不高，整体检测效果欠佳。

发明内容

本申请旨在解决现有间接EILSA检测试剂盒检测效果不佳的问题，提供了一种样品稀释液，应用于间接ELISA检测试剂盒中，能够降低待测样品自身背景的影响，提高检测的特异性和灵敏度。

一种样品稀释液，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：

脱脂奶粉5-15％；

胎牛血清5～15％；

余量为PBST水溶液。

所述PBST水溶液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液，具体配方为：NaCl 8.0g、Na₂HPO₄1.15g、KH₂PO₄ 0.2g、KCl 0.2g、TWeen-20 0.5mL，加水溶解后混合，调pH值至7.2～7.4，再用水定容至1000mL。

可选的，按质量百分比计，所述样品稀释液由以下成分组成：

脱脂奶粉5-10％；

胎牛血清5-10％；

余量为PBST水溶液。

本申请还提供了包含所述样品稀释液的间接ELISA检测试剂盒。该样品稀释液可有效降低待测样品自身背景对检测的影响。

本申请还提供了番鸭细小病毒抗体的间接ELISA检测试剂盒，包括番鸭细小病毒VP3蛋白包被的载体和样品稀释液，所述番鸭细小病毒VP3蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示；所述样品稀释液为上述样品稀释液。