[发明专利]一种芋螺肽的制备方法在审

专利信息
申请号: 202210431744.3 申请日: 2022-04-23
公开(公告)号: CN114805525A 公开(公告)日: 2022-07-29
发明(设计)人: 吴丽芬;张利香;付菜花;李新宇 申请(专利权)人: 深圳市健元医药科技有限公司
主分类号: C07K14/435 分类号: C07K14/435;C07K1/04;C07K1/06
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 518118 广东省深圳市坪山区坑梓街道金*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 芋螺肽 制备 方法
【说明书】:

本发明涉及多肽药物制备领域,公开了一种芋螺肽的制备方法,本发明通过固相多肽合成法制备芋螺肽树脂,芋螺肽树脂酸解得到芋螺肽线性肽,线性肽环化获得芋螺肽粗品,芋螺肽粗品纯化得到芋螺肽精品;其中固相多肽合成法制备芋螺肽树脂的方法为:在Fmoc‑Cys(R3)‑Resin上通过固相偶联合成方法依次接入序列中相应的保护氨基酸或片段,制得芋螺肽线性肽树脂X‑Pyr‑Gly‑Cys(R1)‑Cys(R2)‑Y‑Pro‑Lys‑Gly‑Cys(R3)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Lys(Boc)‑Trp(Boc)‑Cys(R1)‑Arg(Pbf)‑Z‑Arg(Pbf)‑Cys(R2)‑Cys(R3)‑Resin。本发明方法所制备的芋螺肽精品,纯度大于99.5%,纯化收率大于76%,单一杂质小于0.2%。本发明以较简便的工艺步骤同时实现了提高粗肽纯度、控制杂质含量和增加总收率的目标,与现有技术相比,反应操作简单、工期短、成本低、收率高,容易达到产业化的要求,具有广泛的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域,特别涉及一种制备芋螺肽的方法。

技术背景

芋螺肽(conotoxin CTX),又叫芋螺毒素肽。是一类小分子多肽,属神经毒素。芋螺肽是腹足纲芋螺科的肉食性海洋软体动物所分泌的毒液中的一种成分,是芋螺对猎物进行麻痹捕食和防御外敌的武器,每种芋螺毒液中可能含50~200种不等的小分子多肽。

芋螺肽为信号肽介导表达的小分子多肽,是发现的最小核酸编码的动物神经毒素肽,大多由12~46个氨基酸残基组成,且含有2对或3对二硫键,其高密度的二硫键结构使得其稳定性大大提高,从而使得芋螺肽在各种理化环境中仍能很好的保持活性。

芋螺肽,英文名为Mu-conotoxin,具体肽序如下:Pyr1-Gly2-Cys3-Cys4-Asn5-Gly6-Pro7-Lys8-Gly9-Cys10-Ser11-Ser12-Lys13-Trp14-Cys15-Arg16-Asp17-His18-Ala19-Arg20-Cys21-Cys22-CONH2,Cyclic(3→15),(4→21),(10→22)tris(disulfide)

目前芋螺肽制备方式主要有三种,分别是生物组织提取法、化学合成法、基因工程制备。其中,生物组织提取产量受限,从芋螺体内直接分离提取芋螺毒素的工艺复杂,提取困难,成本高;基因工程制备工艺并不成熟,两者均难以实现芋螺毒素的产业化,并不能满足市场的需求。因此,需要通过固相多肽合成法大量合成,降低成本,以此满足科研用途及日益增长的市场需求。

专利CN110894225A公开了一种芋螺肽的规模化制备方法,该方法按照芋螺肽主链C端至N端的氨基酸顺序依次偶联肽树脂,裂解后采用空气氧化法合成三对二硫键,最后纯化制备得到产品。由于芋螺肽的序列较长且序列结构特殊,采用氨基酸逐步缩合的方法合成时,易形成折叠,导致树脂收缩严重,延长反应时间,进而线性肽中产生较多与目标产品性质极为接近的杂质。如D-His18消旋杂质、Gly重排杂质。这些杂质与目标线性肽的理化性质相近,极大增加了二硫键正确配对的难度,产生大量芋螺肽的相关杂质,产品的分离纯化难度,导致产品收率大大降低。因此,迫切需要一种杂质含量低、纯度和收率高,合成成本低的芋螺肽的合成方法。

发明内容

针对现有技术在合成过程中存在副反应多,纯化难,收率低,纯度低的问题,本发明提供了一种芋螺肽的制备方法,该方法如下:

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