[发明专利]一种GTF2H4高表达的内皮细胞系

说明书

本发明公开了一种GTF2H4高表达的内皮细胞系。本发明提供了一种携带有3xflag标签的GTF2H4DNA双链片段，其序列如SEQ ID NO：4所示，本发明还提供了包含如SEQ ID NO：4所示的目的基因序列的表达载体和GTF2H4高表达微血管内皮细胞系，该细胞系能促进HMEC‑1在缺氧条件下的内皮间质转分化，促进细胞的迁移能力，抑制细胞的成管能力，此外，本发明利用PCR搭桥延伸技术构建将3xflag标签融合入GTF2H4过表达重组载体中，这将有助于探索GTF2H4在内皮间质转分化中与其他关键分子的潜在互作机制；本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种GTF2H4高表达的内皮细胞系，属于医学分子生物学和基因工程技术领域。

背景技术

通用转录因子TFIIH(transcription factor IIH)是由10个亚单位组成的转录复合体，参与了转录起始、DNA损伤修复、RNA剪切、调控细胞周期、招募其他转录因子等生物学过程。依据各亚单位的空间构象、毗邻关系及蛋白功能，TFIIH主要分为CORE核心区和具有周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases，CDK)活性的激酶(cdk active kinase，CAK)亚复合体。而作为转录因子Tfb2家族的重要成员，TFIIH亚基4(generaltranscription factor IIH subunit4，GTF2H4)近年来被发现其在细胞生长、发育、代谢等方面发挥重要的调控作用。GTF2H4主要与XPB相互作用，能够稳定XPB并辅助其发挥ATP酶活性，调控细胞周期；与其他亚基一起，GTF2H4参与调控RNA聚合酶Ⅱ介导的mRNA转录过程。目前已有研究发现GTF2H4在心肌梗死以及心肌缺血再灌注的过程中发生时程性变化，这提示GTF2H4可能参与了缺氧或者氧化应激的微环境诱导的病理过程。

内皮-间质转分化(Endothelial to Mesenchymal Transition,EndMT)是指内皮细胞在TGF-β诱导、氧化应激、缺氧等因素的作用下丧失细胞间紧密连接，内皮特异性标记物表达减少，而逐渐获得间充质细胞生物标记物，降解基底膜迁移至血管周围环境的过程。内皮间质化不仅在胚胎心血管生长发育中发挥着重要作用，也参与了动脉粥样硬化、心肌梗死、肺动脉高压等心脑血管疾病的发生发展过程，在心、肺、肾等器官纤维化中都有被证实其扮演着关键的角色。而当前针对内皮向间质转分化的研究尚不成熟，其发生的潜在分子机制还有待被挖掘，新的靶点亟待被发现以应用于逆转内皮间质化，从而改善心血管疾病。内皮间质化可于缺氧缺血诱导下发生的事实提示了GTF2H4极有可能在缺氧或氧化应激微环境与内皮间质化有关联。当前未见有关GTF2H4基因在促进内皮向间质转分化中的报道。

发明内容

本发明旨在构建一种GTF2H4高表达的微血管内皮细胞，从而促进内皮细胞发生内皮间质转分化。

为了达到上述目的，本发明提供了携带有3xflag标签的GTF2H4 DNA双链片段，其序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供了一种表达载体，所述的表达载体包含如SEQ ID NO：4所示的目的基因序列。

优选地，所述的表达载体选自病毒、真菌或细菌表达载体。

本发明还提供了一种包含上述的表达载体的细胞，所述细胞为人微血管内皮细胞HMEC-1。

本发明还提供了一种重组慢病毒表达载体的制备方法，包括：将慢病毒载体pHBLV-CMV-MCS-EF1-NEO通过限制性内切酶EcoRI和BamHI酶切后，将SEQ ID NO：4所示的DNA双链片段克隆至酶切后的慢病毒载体，得到重组慢病毒载体。

本发明还提供了一种GTF2H4高表达的人微血管内皮细胞系的制备方法，包括如下步骤：