[发明专利]一种生产甲基酮的重组酿酒酵母及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种生产甲基酮的重组酿酒酵母的构建方法，其特征在于，在酿酒酵母中对β-酮酰辅酶A硫解酶基因POT1进行敲除或失活，或降低该基因的表达或活性。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，进一步在所述酿酒酵母中过表达酰基辅酶A氧化酶基因POX1，或(3R)-羟烷基-辅酶A脱氢酶/2-烯酰辅酶A水合酶2基因POX2，或酰基辅酶A硫酯酶基因TES1，或脂酰辅酶A转运蛋白编码基因PXA1/PXA2，或外源β-酮酸脱羧酶基因ADC中的一种或多种；

优选地，所述酰基辅酶A氧化酶基因POX1，或(3R)-羟烷基-辅酶A脱氢酶/2-烯酰辅酶A水合酶2基因POX2，或酰基辅酶A硫酯酶基因TES1，或脂酰辅酶A转运蛋白编码基因PXA1/PXA2的过表达是过表达内源基因；

优选地，所述外源β-酮酸脱羧酶基因来源于Clostridium acetobutylicum，更优选地其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，进一步在所述酿酒酵母中过表达外源酰基辅酶A氧化酶基因ACO，或烯酰辅酶A水合酶基因HTD，或3-羟烷基-辅酶A脱氢酶基因KR，或酰基辅酶A硫酯酶基因FadM，或β-酮酸脱羧酶基因MKS1中的一种或多种。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述烯酰辅酶A水合酶基因HTD的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列；所述3-羟烷基-辅酶A脱氢酶基因KR的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；

优选地，所述外源酰基辅酶A氧化酶基因ACO来源于Micrococcus luteus，更优选地其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

更优选地，所述烯酰辅酶A水合酶基因HTD来源于Yarrowialipolytica，更优选地其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；

所述3-羟烷基-辅酶A脱氢酶基因KR来源于Yarrowialipolytica，更优选地其核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

酰基辅酶A硫酯酶基因FadM来源于大肠杆菌，更优选地其核苷酸序列如SEQ ID NO：5；

β-酮酸脱羧酶基因MKS1来源于Solanum habrochaites，更优选地其核苷酸序列如SEQID NO：6所示。

5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，进一步将所述酿酒酵母中的半乳糖调节基因GAL80进行敲除或失活，或降低该基因的表达或活性。

6.如权利要求1至5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述酿酒酵母的出发菌株的基因型为MATa MAL2-8c SUC2 ura3-52。

7.如权利要求1至5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述酿酒酵母的出发菌株的基因型为CEN.PK113-5D。

8.如权利要求1至7任一项所述的构建方法获得的生产甲基酮的重组酿酒酵母。

9.如权利要求8所述的重组酿酒酵母在生产甲基酮中的应用。