[发明专利]PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测试剂盒，其特征在于，包括：

引导PfAgo蛋白靶向B19病毒ns1基因的gDNA，具体为如序列SEQ ID NO:1所示的gt-B19、如序列SEQ ID NO:2所示的gf-B19以及如序列SEQ ID NO:3所示的gr-B19，或仅为如序列SEQ ID NO:2所示的gf-B19；

带有荧光基团和猝灭基团的分子信标；

PfAgo蛋白。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述分子信标的序列如SEQ ID NO:4所示。

3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括用于特异性扩增ns1基因上靶标序列的扩增试剂。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括序列如SEQ IDNO:5～6所示的引物对。

5.如权利要求1～4任意一项权利要求所述的检测试剂盒在非疾病诊断和治疗目的中鉴定或辅助鉴定B19病毒的应用。

6.一种PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、对待测样本扩增得到tDNA；

S2、设立包括5’磷酸化的gDNA、PfAgo蛋白、tDNA、PfAgo反应缓冲液和分子信标的反应体系，进行切割反应；

S3、反应结束后，对上述反应体系进行荧光检测。

7.根据权利要求6所述PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测方法，其特征在于，步骤S2所述反应体系中，gDNA与PfAgo蛋白的摩尔比为1∶460。

8.根据权利要求6所述PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测方法，其特征在于，所述切割反应的温度为90～98℃。

9.根据权利要求8所述PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测方法，其特征在于，所述切割反应的温度为95℃。

10.根据权利要求6所述PfAgo蛋白介导的B19病毒核酸检测方法，其特征在于，步骤S2所述反应体系中，tDNA的含量≥0.1pmol。