[发明专利]pH/酶双响应型介孔硅基药物载体MSN@HA及其制备方法与载药条件和靶向应用

说明书

本发明涉及介孔二氧化硅纳米粒子药物递送系统，属于高分子化合物的组合物领域，具体涉及pH/酶双响应型介孔硅基药物载体MSN@HA，利用APTES对MSN进行表面修饰引入氨基，然后通过酰胺化反应，依次修饰CMCS和HA，制备出pH和酶双重响应型载体MSN@HA。当MSN@CMCS和HA用量为20.0 mg和10.0 mg、EDC和NHS用量为50.0 mg和25.0 mg、酰胺化反应18 h以及初始药物浓度为500 mg/L时，载药性能最佳，此时的载药率为23.93%。QU@MSN@HA具有靶向性能，将其与乳腺癌细胞和巨噬细胞共培养，巨噬细胞组的细胞活性为95.79%，而乳腺癌细胞组的细胞活性仅为75.85%，两者相差了19.94%。QU@MSN@HA具有良好的肿瘤识别能力。

技术领域

本发明涉及介孔二氧化硅纳米粒子药物递送系统，属于高分子化合物的组合物领域，具体是涉及一种pH/酶双响应型介孔硅基药物载体MSN@HA及其制备方法和载药条件和靶向应用。

背景技术

羧甲基壳聚糖（CMCS）是壳聚糖的羧甲基化衍生物，具有良好的水溶性、抗菌活性、生物可降解和延长体内滞留时间等诸多优势，同时一定程度上可以抑制肿瘤细胞的迁移，在生物医药领域中被广大学者所认知。此外，它的分子链中含有大量的-NH₂和-COOH基团，在不同的pH条件下，其电离程度变化很大；因此CMCS具有良好的pH敏感性。CD44是一类跨膜糖蛋白，研究发现CD44受体与肿瘤细胞的成瘤性和转移性有关，且在多种肿瘤细胞中过表达，因此针对CD44的靶向治疗一直被广泛研究。由于CD44肽链的N端可以与透明质酸（HA）特异结合，故被认为HA的受体。此外HA可以被肿瘤细胞内过表达的透明质酸酶（HAase）特异性降解，因此HA在肿瘤靶向和酶响应释药领域具有较大的应用前景。

发明内容

为解决上述问题，本发明采用以下的技术方案：

pH/酶双响应型介孔硅基药物载体MSN@HA，其中，利用APTES对MSN进行表面修饰引入氨基，然后通过酰胺化反应，依次修饰CMCS和HA，制备出pH和酶双重响应型载体MSN@HA。

pH/酶双响应型介孔硅基药物载体MSN@HA的制备方法，其中：所述制备方法包括如下步骤：

1）MSN的制备

将1.0 g CTAB、3.5 mL 2 M NaOH溶液和480 mL去离子水加入到一个三口烧瓶中，在80℃下磁力搅拌30 min；然后在上述混合溶液中缓慢滴加5.0 mL的TEOS，实验结束后继续反应3 h；溶液冷却到室温后，产物通过离心收集，并用无水乙醇和去离子水交替洗涤3次；最后，真空干燥12 h后得到CTAB@MSN的产物。

2）MSN-NH2的制备

烧瓶中加入0.5 g MSN和50.0 mL甲苯，超声使其充分分散，然后加入5.0 mLAPTES，在80℃下回流12 h；反应结束后，通过离心收集产物，无水乙醇洗涤数次；然后将产物置于真空干燥箱中，25℃干燥12 h即可得MSN-NH₂；

3）MSN@CMCS的制备

称取0.10 g的CMCS溶解于10.0 mL的去离子水中，超声分散后加入0.25 g的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC和0.15 g的N-羟基琥珀酰亚胺NHS，室温反应4 h,使其充分活化。然后加入0.15 g的MSN@NH₂的，继续反应12 h。反应结束后，离心收集，去离子水洗涤数次后，置于真空干燥箱中干燥12 h即得MSN@CMCS。

4）MSN@HA的制备

称取一定量的HA、EDC、NHS和50.0 mL的去离子水加入到三口烧瓶中，超声分散后，磁力搅拌4 h，完成HA的活化。然后加入适量的MSN@CMCS，室温反应一段时间后，离心收集，用去离子水洗涤数次后，分散于乙醇中，干燥即得MSN@HA。