[发明专利]新型冠状病毒疫苗中德尔塔变异株抗原含量检测方法、试剂和试剂盒

说明书

本发明实施例公开了一种新型冠状病毒疫苗中德尔塔变异株抗原含量检测方法，包括：制备针对新型冠状病毒德尔塔变异株的S蛋白受体结合区域(RBD)表位的山羊多克隆抗体包被酶标板，封闭所述酶标板后洗板、拍干；分别加入待测疫苗抗原样品和抗原标准品，于板内按不同梯度稀释后，将含有所述待测疫苗抗原样品和抗原标准品的酶标板封板37℃孵育1h～2h后洗板、拍干；加入针对新型冠状病毒德尔塔变异株的S蛋白受体结合区域表位的兔多克隆抗体作为一抗，将含有所述一抗的酶标板封板37℃孵育1h～2h后洗板、拍干；加入适宜稀释度的辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔Ig抗体作为二抗，得到含有二抗的酶标板，封板37℃孵育1h～2h后洗板；加入显色液进行显色反应后，测定所述待测疫苗抗原样品的抗原含量。本发明可显著提高新冠疫苗中德尔塔变异株抗原含量。

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，尤其涉及一种新型冠状病毒疫苗中德尔塔变异株抗原含量检测方法、试剂和试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)对由新型冠状病毒(SARS-CoV-2，简称新冠病毒)感染引起的严重呼吸系统疾病新冠肺炎具有预防作用，特别是减少重症、死亡病例方面效果显著。新冠病毒外壳表面的S蛋白可作为新冠病毒的保护性抗原，可诱发机体产生中和抗体，同时还与病毒侵染相关，因此成为目前研发疫苗治疗的靶点。然而，其S蛋白受体结合域(RBD)可发生非同义突变，使得新冠病毒具有较高的变异能力，引起病毒传播能力和致病能力的改变，目前发现新冠病毒德尔塔突变株在S蛋白上存在三个区域的突变，可导致新冠病毒疫苗所诱导的抗体中和作用降低，从而导致现有技术的新冠疫苗中针对新冠病毒变异株抗原检测的有效性大大降低。

发明内容

本发明所解决的技术问题是，提供一种新型冠状病毒疫苗中德尔塔变异株抗原含量检测方法、试剂和试剂盒，以显著提高新冠疫苗中对德尔塔变异株抗原的检测有效性。

为解决以上技术问题，第一方面，本发明实施例提供一种新型冠状病毒疫苗中德尔塔变异株抗原含量检测方法，包括以下步骤：

制备针对新型冠状病毒德尔塔变异株的S蛋白受体结合区域(RBD)表位的山羊多克隆抗体包被酶标板，封闭所述酶标板后洗板、拍干；

分别加入待测疫苗抗原样品和抗原标准品，于板内按不同梯度稀释后，将含有所述待测疫苗抗原样品和抗原标准品的酶标板封板37℃孵育1h～2h后洗板、拍干；

加入针对新型冠状病毒德尔塔变异株的s蛋白受体结合区域表位的兔多克隆抗体作为一抗，将含有所述一抗的酶标板封板37℃孵育1h～2h后洗板、拍干；

加入适宜稀释度的辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔Ig抗体作为二抗，得到含有二抗的酶标板，封板37℃孵育1h～2h后洗板；

加入显色液进行显示反应后，测定所述待测疫苗抗原样品的抗原含量。

在一些可能的实施方式中，所述制备针对新型冠状病毒德尔塔变异株的S蛋白受体结合区域(RBD)表位的山羊多克隆抗体包被酶标板包括：

取所述山羊多克隆抗体用包被液稀释后，加入酶标板中，2-8℃孵育过夜；

将所述山羊多克隆抗体包被酶标板洗板拍干，加入封闭液封闭所述酶标板，封闭后置于37℃孵育2h；

将所述山羊多克隆抗体包被酶标板洗板拍干，得到所述第一多克隆抗体包被酶标板。

在一些可能的实施方式中，计算所述待测疫苗抗原样品的抗原含量包括：

将所述终止反应的酶标板放入酶标仪中，获取所述抗原标准品和所述待测疫苗抗原样品不同稀释度下在酶标仪中波长450nm处的OD值；

依据所述抗原标准品和所述待测疫苗抗原样品不同稀释度下波长450nm处的OD值经对数转换后建立量反应平行线模型曲线，根据所述抗原标准品和所述待测疫苗抗原样品剂量关系的比值计算所述待测疫苗抗原样品的抗原含量。