[发明专利]一种可以高精确度和敏感性识别猪伪狂犬病毒的纳米抗体、制备方法和应用

权利要求书

1.一种识别猪伪狂犬病毒的纳米抗体，所述纳米抗体靶向的是PRV的gB蛋白和gC蛋白的抗原表位融合蛋白，将其命名为PRV-BC21，其氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，其制备方法包括以下步骤：

(1)重组真核表达载体的构建：通过PCR扩增、酶切，将编码纳米抗体PRV-BC21的DNA序列连接至表达载体中获得阳性质粒；

(2)将步骤(1)中阳性质粒转化宿主细胞，诱导表达纳米抗体PRV-BC21。

2.一种猪伪狂犬病毒的快速检测试纸条，其特征在于所述猪伪狂犬病毒的快速检测试纸条包括底板、吸水垫纸、NC膜、金垫、样品层析垫，从底板上从上到下依次粘贴吸水垫纸、NC膜、金垫、样品层析垫，其中所述金垫上设置有胶体金标记的纳米抗体PRV-BC21；所述NC膜上设置有相互分离的检测区和质控区，所述检测区喷涂PRV包被抗原，所述质控区喷涂有与胶体金标记的纳米抗体PRV-BC21特异结合的抗体，其中纳米抗体PRV-BC21的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.一种猪伪狂犬病毒的快速检测试纸条的制备方法，

1)纯化纳米抗体PRV-BC21，透析待用；

2)胶体金标记纳米抗体PRV-BC21；

3)BSA封闭反应；

4)离心后用含1％BSA的PBS液洗涤保留沉淀；

5)复溶后喷涂金标垫；

6)包被NC膜；

7)在室温低湿度条件下进行干燥；从底板上从上到下依次粘贴吸水纸、NC膜、金垫、样品层析垫，裁切待用；

8)对胶体金试纸条进行应用测试，得出胶体金试纸条的检测限为10ng/mL级别，能满足快速检测PRV的要求，其中纳米抗体PRV-BC21的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

4.权利要求3中所述的猪伪狂犬病毒的快速检测试纸条在猪伪狂犬病毒的非疾病诊断的快速检测中的应用。

5.权利要求1所述的一种识别猪伪狂犬病毒的纳米抗体在猪伪狂犬病毒的非疾病诊断的快速检测中的应用。