[发明专利]肺部病原菌检测的引物探针及其试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及肺部病原菌检测的引物探针组合及其应用、试剂盒。本发明引物探针组合可实现曲霉属、耶氏孢子菌、隐球菌和诺卡菌四种肺部感染菌属的快速检测，准确性和特异性好、灵敏度高，便于实时评估患者健康状况，及时为临床医生提供辅助治疗建议，对提高感染患者的存活率有着重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及肺部病原菌检测的引物探针组合及其试剂盒。

背景技术

肺部感染是指包括终末气道、肺泡腔及肺间质在内的肺实质炎症，病因以感染最为常见，还可由理化、免疫及药物引起。肺部感染包括细菌性肺部感染、真菌性肺部感染、病毒性肺部感染、支原体性肺部感染等。因其种类繁多，本项目集中在肺侵袭性真菌感染和诺卡氏菌属感染。肺袭蚀性真菌又包括：念球菌属、曲霉属、隐球菌属、接合菌门里的毛霉目和肺孢子菌属。因念球菌属主要通过血流感染，接合菌门肺部感染的发生率为2.9/100000引起的死亡率为86％，样本非常难获取，本项目主要针对的肺侵袭性真菌为曲霉属、隐球菌属、肺孢子菌属等。

肺侵袭性真菌感染引起的真菌病分为原发性和继发性两种，原发性肺侵袭性真菌病主要是社区获得性感染，因其宿主可以没有真菌感染的危险因素、临床过程相对缓和、凶险程度低等特点。医学上比较关注的是继发性肺侵袭性真菌感染，继发性真菌感染主要发生在如：器官移植受者、恶性血液病患者、恶性肿瘤患者等免疫受损或其他危重病患者身上。其特征是：医院获得性感染，存在比较明确的真菌感染高危危险因素、临床过程急骤和凶险。

近30年来，随着实体器官及造血干细胞移植技术和导管介入及留置技术的开发和利用，以及免疫抑制剂的大量使用、恶性肿瘤患者放疗化疗进行和抗生素的广泛使用，继发性侵袭性真菌感染的发病率及致死率在全球范围内显著升高。流行病学研究显示，目前全球每年有200万人被侵蚀性真菌感染，院内侵袭性真菌感染率为7.5％，肿瘤病人侵袭性真菌感染率为8％，严重烧伤及创伤病人的侵袭性真菌感染率高达16％，而侵袭性真菌感染的致死率高达55％-70％，因此侵袭性真菌感染已成为严重威胁人类生命健康的疾病。

一般认为肺侵袭性真菌感染与血液恶性肿瘤和造血干细胞移植导致的粒细胞缺乏关系最为密切，但最近美国1000多家医疗机构对l88l例侵袭性真菌感染患者的统计分析结果显示，最易发生侵袭性真菌感染的基础疾病患病群体中，居于前三位的分别是：COPD、糖尿病、恶性血液病，分别占中感染率的22.2％、21.7％、9.6％。国内研究报道显示：由这些菌属引起的曲霉菌病、隐球菌病、肺孢子菌病分别占侵袭性真菌病的37.9％、15.6％、2.1％。

诺卡氏菌病的发生率为0.31/100000，与肺侵袭性真菌感染的患病人群一致，其主要感染部位为肺部，主要感染人群为HIV感染、器官移植、接受放化疗的恶性肿瘤、慢性阻塞性肺炎、糖尿病、长期使用糖皮质激素等引起免疫功能缺陷或受损的患者。

对于这些不同种属的肺部感染菌引起感染病的检测方法略有差异，但其主要检测方法包括：痰液或肺泡灌洗液镜检、组织病理学检查、血清抗原及其代谢物质检测，这些检测结果需要结合患者的临床表征和影像特征共同判定。随着PCR技术的发展，目前一些荧光定量PCR和环介导等方法也被引进到肺部感染病的检测中。