[发明专利]一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白和重组森林脑炎病毒细菌样颗粒疫苗及它们的应用

说明书

本发明公开一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白和重组森林脑炎病毒细菌样颗粒疫苗及它们的应用，属于疫苗技术领域。为了提供一种免疫效力更好的森林脑炎病毒疫苗。本发明提供一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白，所述融合蛋白是森林脑炎病毒包膜蛋白E蛋白，利用Linker将锚钩蛋白PA3和抗原蛋白串联获得融合蛋白，融合蛋白与GEM颗粒结合，将抗原蛋白展示在GEM颗粒表面制备获得的重组森林脑炎病毒细菌样颗粒疫苗。GEM颗粒具有良好的抗原表面展示性质，可诱导小鼠产生特异性免疫应答。

技术领域

本发明属于疫苗技术领域，具体涉及一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白和重组森林脑炎病毒细菌样颗粒疫苗及它们的应用。

背景技术

森林脑炎(Tick-borne encephalitis，TBE)又称蜱传脑炎，是在欧亚大陆上普遍存在的由蜱传脑炎病毒引起一种嗜神经性疾病。近年来，该病的发病率和流行范围不断增加。可造成严重的急性临床病程和长期病状，在人类中引起轻度或中度发热性疾病，并伴随致死性脑炎等后遗症，病死率高达30％。目前还没有针对森林脑炎的具体治疗方法，但免疫可以有效预防森林脑炎。

森林脑炎病毒(Tick-borne encephalitis virus，TBEV)为黄病毒科黄病毒属的单股正链 RNA病毒，长约11kb，包含一个开放阅读框，编码三个结构蛋白(C、prM和E)和七个非结构蛋白(NS1,、NS2A,、NS2B,、NS3,、NS4A、NS4B和NS5)。其中E蛋白为包膜蛋白，含有中和表位，在免疫预防中发挥重要作用。2005年，国际病毒命名委员会根据基因型将 TBEV分为三种亚型：欧洲亚型(Eu-TBEV)、西伯利亚亚型(Sib-TBEV)和远东亚型 (FE-TBEV)，每一种亚型都可导致不同严重程度的临床疾病。近年来，在此基础上又分离出了贝加尔亚型(Bkl-TBEV)和喜马拉雅亚型(Him-TBEV)，目前并未发现相应病例，其致病性有待进一步研究。其中FE-TBEV毒力最强，可造成严重的神经系统疾病，病死率高达30％，极易出现神经系统后遗症。目前蜱传脑炎尚无治疗的特效药，临床上只能采取对症治疗，目前获批的几种灭活疫苗尽管表现了良好的安全性和免疫原性，但需多次免疫且成本较高，可能会出现灭活不完全的情况，因此市场上亟需安全性高、成本低、能够刺激机体产生高的免疫力的新型TBEV疫苗。

传统灭活疫苗(这些传统疫苗都是灭活疫苗)FSME-Immun和Encepur，基础免疫程序需要3剂，接种程序为第1、2剂次间隔1-3个月，第2、3剂次间隔5-12个月(Encepur需要9-12个月)，Encepur可在0、7、21d接种，之后12-18个月接种第4剂。

传统灭活疫苗TBE-Moscow和Ence Vir，2剂次，Ence Vir不推荐用于3-17岁的人群可能会引起≤19％受种者的高热和过敏性反应，安全性低。

发明内容

本发明的目的是为了有提供一种安全性高、成本低且免疫效力好的森林脑炎病毒疫苗。

本发明提供一种重组森林脑炎病毒的融合蛋白，所述融合蛋白是森林脑炎病毒包膜蛋白 E蛋白，利用Linker将锚钩蛋白PA3和森林脑炎病毒包膜蛋白E蛋白串联获得融合蛋白。

进一步地限定，所述Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

进一步地限定，所述锚钩蛋白PA3的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步地限定，森林脑炎病毒包膜蛋白E蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

进一步地限定，所述融合蛋白的氨基酸序列SEQ ID NO.8所示。

本发明提供一种编码上述的融合蛋白的基因。

本发明提供一种森林脑炎病毒包膜蛋白E蛋白在制备森林脑炎病毒疫苗中应用。

进一步地限定，森林脑炎病毒包膜蛋白E蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。