[发明专利]一种猪支原体肺炎灭活疫苗效力评估方法

权利要求书

1.一种猪支原体肺炎灭活疫苗效力评估方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)向豚鼠皮下注射猪支原体肺炎灭活疫苗，注射后10～21日以相同剂量第二次注射疫苗加强免疫；

(2)第二次注射疫苗后10～30日，向豚鼠背部不同部位皮内注射等体积的不同检测试剂，所述检测试剂包括：植物血球凝集素溶液和猪肺炎支原体抗原溶液；所述肺炎支原体浓度为10^9.0～10^10.0CCU/ml；

(3)注射后24小时，分别测量和计算不同检测试剂注射部位出现的红斑大小，计算硬结反应比值；所述硬结反应比值的计算方法为：

r＝d_s/d₀

其中r是硬结反应比值，d_s是注射猪肺炎支原体抗原溶液部位的红斑大小，d₀是注射植物血球凝集素溶液部位的红斑大小。

2.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述红斑大小是指平均红斑直径或红斑面积。

3.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述豚鼠是SPF级别豚鼠。

4.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，步骤(1)所述第二次注射是在第一次注射后14日。

5.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，步骤(1)所述疫苗的注射剂量为0.1～0.4mL/只，优选为0.2mL/只。

6.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，步骤(2)所述不同检测试剂的注射是在第二次注射疫苗后21日。

7.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，步骤(2)所述猪肺炎支原体抗原是猪肺炎支原体发酵菌液纯化并超声破碎后得到的抗原。

8.如权利要求7所述的评估方法，其特征在于，所述猪肺炎支原体抗原是按照如下步骤制备得到的抗原：

(a)收集发酵的猪肺炎支原体菌液；

(b)4℃离心，沉淀重悬，重复三次，最后一次重悬控制菌液中菌体浓度为10^9.0～10^10.0CCU/ml；

(c)取步骤(b)得到的菌液经-80℃冻融，超声破碎，得到超声破碎抗原。

9.如权利要求8所述的评估方法，其特征在于，步骤(c)所述超声破碎是：以300W功率超声破碎3次，每次8min。

10.如权利要求1所述的评估方法，其特征在于，步骤(2)还包括向豚鼠背部与检测试剂注射部位不同的部位皮内注射等体积生理盐水作为阴性对照的步骤。