[发明专利]基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法

权利要求书

1.一种基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)干血斑样本前处理：

1-1)萃取：从干血斑样本上取血片置于容器中，加入内标萃取液，震荡；

1-2)氮吹：离心，然后氮吹干；

1-3)衍生：向步骤1-2)得到的产物中加入含盐酸羟胺的乙腈水溶液，混匀，然后恒温衍生，制得测试样；

2)采用液相色谱串联质谱的方法对测试样进行检测，通过标准曲线计算得到待测干血斑样本中的12种类固醇激素的含量；

其中，所述12种类固醇激素包括：双氢睾酮、脱氢表雄酮、17-羟孕酮、孕酮、皮质酮、可的松、雌酮、雌二醇、雌三醇、17-羟孕烯醇酮、醛固酮和雄烯二酮。

2.根据权利要求1所述的基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：

1-1)萃取：从干血斑样本上取若干个血片置于离心管中，加入内标萃取液，室温下300-1500rpm下震荡20-80min；

1-2)氮吹：2500-10000rpm下离心2-10min，得到提取液，然后将提取液转移到新的离心管中，然后氮吹干除去溶剂；

1-3)衍生：向步骤1-2)得到的产物中加入含50-200mM盐酸羟胺的乙腈体积分数为15-60％的乙腈水溶液，300-1500rpm下混匀0.5-2min，然后在40-70℃下恒温衍生15-60min，制得测试样。

3.根据权利要求2所述的基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：

1-1)萃取：从干血斑样本上取2个3mm的血片置于2mL的离心管中，加入100-400μL内标萃取液，室温下750rpm下震荡40min；

1-2)氮吹：5000rpm下离心5min，得到提取液，然后将提取液转移到新的2mL的离心管中，然后氮吹干除去溶剂；

1-3)衍生：向步骤1-2)得到的产物中加入40-160uL含100mM盐酸羟胺的乙腈体积分数为30％的乙腈水溶液，750rpm下混匀1min，然后在60℃下恒温衍生15-60min，制得测试样。

4.根据权利要求3所述的基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：

1-1)萃取：从干血斑样本上取2个3mm的血片置于2mL的离心管中，加入200μL内标萃取液，室温下750rpm下震荡40min；

1-2)氮吹：5000rpm下离心5min，得到提取液，然后将提取液转移到新的2mL的离心管中，然后氮吹干除去溶剂；

1-3)衍生：向步骤1-2)得到的产物中加入80uL含100mM盐酸羟胺的乙腈体积分数为30％的乙腈水溶液，750rpm下混匀1min，然后在60℃下恒温衍生15-60min，制得测试样。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，其中，液相色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅胶填料柱；

流动相：A相为0.2mM的氟化铵水溶液，B相为0.2mM的氟化铵甲醇溶液；

梯度洗脱程序：初始，40％B；0-4min，60％B；4-5.7min，67％B；5.7-8.3min，70％B；8.3-8.5min，90％B；8.5-11.3min，90％B；11.3-11.5min，40％B；11.5-13min，40％B；

流速：0.7mL/min；进样量：10μL；柱温：40℃。

6.根据权利要求1-4中任意一项所述的基于衍生化的干血斑中12种类固醇激素的检测方法，其特征在于，质谱条件为：

离子源：电喷雾离子源；检测方式：多反应监测；气帘气30psi，喷雾气50psi，辅助加热气60psi，温度500℃，离子化电压：+5500V/-4500V，碰撞气：10psi。