[发明专利]一种使用重组抗体制备胶乳增强免疫比浊试剂的方法

权利要求书

1.Fc端修饰的重组抗体，其特征在于，所述抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。

2.权利要求1所述Fc端修饰的重组抗体在制备利用胶乳增强免疫比浊法检测C反应蛋白时所需的反应试剂R2中的应用。

3.根据权利要求1所述的重组抗体的制备方法，其特征在于，所述重组抗体是以C反应蛋白为抗原的鼠抗Fab端和人IgG1型Fc端组成的重组抗体，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将人的IgG1抗体的Fc端序列，进行重新编辑，在CH2和CH3区域间插入10个甘氨酸或10个赖氨酸；

(2)将鼠抗Fab端和步骤(1)修饰得到的人IgG1抗体Fc端，在基因层面进行编辑，并通过基因合成得到编码所述抗体重链和轻链的碱基序列；

(3)利用质粒载体pCDNA3，将步骤(2)所得碱基序列导入哺乳动物细胞中进行表达，筛选得到具有Puro和G4218抗性的重组细胞株；

(4)将步骤(3)所得重组细胞株进行体外培养，获得Fc端修饰的重组抗体。

4.一种以权利要求1所述Fc端修饰的重组抗体为原料的试剂，其特征在于，所述试剂是利用胶乳增强免疫比浊法检测C反应蛋白时所需的反应试剂R2，所述试剂是将所述Fc端修饰的重组抗体通过共价键与羧基胶乳微球连接得到的。

5.权利要求4所述试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用ECD活化羧基乳胶微球，离心后，弃上清、收集沉淀，沉淀即为活化后的乳胶微球；

(2)将收集得到的沉淀在缓冲体系中超声重悬，加入重组抗体，使将活化的乳胶微球与重组抗体进行偶联，然后，离心、弃上清、收集沉淀；

(3)将步骤(2)收集得到的沉淀在封闭缓冲液中进行超声重悬，然后，离心、弃上清、收集沉淀；

(4)将步骤(3)收集得到的沉淀在稀释缓冲液中进行超声重悬，制成胶乳溶液；

(5)将上述胶乳溶液使用稀释缓冲液按一定比例稀释后，制备成反应试剂R2。

6.权利要求4所述试剂在制备利用胶乳增强免疫比浊法检测C反应蛋白的试剂中的应用。