[发明专利]一种使用重组抗体制备胶乳增强免疫比浊试剂的方法

说明书

本发明公开了一种使用重组抗体制备胶乳增强免疫比浊试剂的方法，属于体外诊断试剂领域。本发明在抗体Fc端的CH2和CH3之间插入了一段氨基酸序列，得到重组抗体，不仅增加了Fc端的长度，而且增加了其疏水性，使其更容易与胶乳微球进行偶联。利用所述重组抗体制作用于胶乳增强免疫比浊法的反应试剂R2，能够避免采用普通多抗和单抗导致的批间差不稳定、人力投入巨大且抗体得率不易提升的问题。

技术领域

本发明涉及一种使用重组抗体制备胶乳增强免疫比浊试剂的方法，特别是涉及一种使用Fc端修饰的重组抗体制备胶乳增强免疫比浊法试剂盒的方法，属于体外诊断试剂领域。

背景技术

胶乳增强免疫比浊法(PETIA)是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。PETIA法大体分为两种：散射比浊检测法和透射比浊检测法。这两种的基本原理非常相似，都是在高分子胶乳微球表面偶联抗体，当偶联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内迅速聚集在一起，改变反应液的散光性能或透光性能。并且，反应液散光性能或透光性能的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反应被测抗原的浓度。

胶乳增强免疫比浊法一般采用双试剂，即反应试剂(R1)和反应试剂(R2)，其中，R1为带有一定浓度促凝剂的缓冲溶液，R2为偶联抗体的胶乳微球溶液。R2是胶乳免疫比浊法的核心部分，优质、廉价的抗体，对胶乳免疫比浊试剂的性能和市场价位起到了决定性的作用。目前，PETIA检测试剂所采用的乳胶微球颗粒多为惰性微球和羧基微球。前者通过物理吸附将抗体结合在微球表面，后者通过羧基与抗体的氨基端共价结合，在微球与抗体之间形成侨联化学臂，降低位阻效应，提高抗体的结合率。

目前PETIA检测试剂所采用的抗体多为羊多克隆抗体、兔多克隆抗体或鼠单克隆抗体，均为动物来源，存在一定的生物安全问题，且动物饲养，饲养场地，和人工投入巨大。而且，多克隆抗体生产一致性低，产量不稳定；单克隆抗体虽然生产一致性较高、特异性强、灵敏度高，但是，随着时间的推移，杂交瘤细胞系会出现基因漂移，导致生产的抗体出现变化，长时间下去，也会出现抗体得率变低、质量变差的情况。所以作为诊断试剂的核心原材料，一方面多克隆抗体及单克隆抗体均无法很好地保证PETIA检测试剂的生产质量，及后续持续的稳定生产。另一方面，常用到的IGG单抗结构和功能的定式，也限制了作为试剂开发关键步骤之一的微球和抗体偶联工艺的进一步改良。

发明内容

[技术问题]

本发明旨在提供一种使用Fc修饰后重组抗体制备胶乳增强免疫比浊法试剂的方法，进而一方面解决多抗和单抗批间差不稳定、人力投入巨大且抗体得率不易提升等问题，另一方面有效提高了试剂制备过程中固相和抗体的偶联效率，为PETIA检测试剂进一步降低成本，提升品质形成了有利支撑。

[技术方案]

本发明提供一种对用于制备胶乳增强免疫比浊法反应试剂R2的重组抗体进行修饰的方法，是在抗体Fc端的CH2和CH3区域之间插入数个氨基酸，以增加抗体Fc端的长度和疏水性。插入的氨基酸的数量不影响整个抗体的功能，又能增加抗体Fc端的长度和疏水性。

在本发明的某些实施方式中，是在抗体Fc端的CH2和CH3区域之间插入10氨基酸，所述氨基酸是甘氨酸或赖氨酸。

在本发明的某些实施方式中，针对以C反应蛋白为抗原的鼠抗Fab端和人IgG1型Fc端的重组抗体，在抗体的Fc端的CH2和CH3区域之间，插入了10个甘氨酸或10个赖氨酸。

本发明提供Fc端修饰的重组抗体，所述Fc端修饰的重组抗体的轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4所示。所述Fc端修饰的重组抗体可用于制备利用胶乳增强免疫比浊法检测C反应蛋白时所需的反应试剂R2。

本发明提供所述Fc端修饰的重组抗体的制备(修饰)方法，包括以下步骤：