[发明专利]一种巨噬细胞特异性USP13过表达的重组腺相关病毒及其应用

权利要求书

1.巨噬细胞特异性USP13过表达的重组腺相关病毒在制备治疗脊髓损伤的药物中的应用，所述巨噬细胞特异性USP13过表达的重组腺相关病毒的构建方法包括如下步骤：

(1)体外克隆USP13基因，所述USP13基因的序列如SEQ ID NO:1所示；

(2)将USP13基因和pAAV-Lyz2载体分别用限制性内切酶BamH I和EcoR I进行双酶切，然后进行DNA连接反应，得到含有目的基因USP13的重组穿梭质粒，对其进行扩增、提纯；

(3)将含有目的基因USP13的重组穿梭质粒和含腺相关病毒基因组DNA的pHelper和pAAV-RC质粒按摩尔比1:1:1混合，共转染AAV-293细胞，培养后收获细胞，反复冻融后过滤，获得病毒液，纯化后，得到巨噬细胞特异性USP13过表达的重组腺相关病毒。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述体外克隆USP13基因的方法为：提取并体外培养原代巨噬细胞，收集细胞后提取总RNA，逆转录得到cDNA，然后以cDNA为模板，进行PCR扩增反应，得到USP13基因；所述PCR扩增的引物序列为：前引物：5’-CGTCCAGGTCCTGTTCTCC-3’，后引物：5’-TACCCATGTAGTCCTCCGCA-3’。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药学上可接受的载体包括稀释剂和赋形剂。