[发明专利]一种无菌丰年虫的制作方法及其应用

权利要求书

1.一种无菌丰年虫的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：将丰年虫卵漂洗杀菌处理、 灭菌水清洗干净后用筛网过滤，放入灭菌盐水中制成灭菌盐水虫卵混合液，然后进 行无菌孵化，获得无菌丰年虫，无菌孵化方法选自以下方式中的任意一种： （a）将灭菌盐水虫卵混合液置于封口膜封口的无菌瓶中，光照条件下在摇床上摇晃 孵化； （b）将灭菌盐水虫卵混合液置于封口膜封口的无菌瓶中，避光条件下在培养箱中静 置孵化； （c）将灭菌盐水虫卵混合液置于一次性培养皿中，封口后，避光条件下在培养箱中 静置孵化； （d）将灭菌盐水虫卵混合液涂布在 TSA 平板上，封口后，避光条件下在培养箱中静 置培养； （e）将灭菌盐水虫卵混合液置于盛有 TSB 或 BHI 培养基的无菌容器中，封口后，光 照条件下在摇床上摇晃孵化； 所述筛网为灭菌超密短把滤网，长 17.5 cm，半径 6.0 cm，孔径 170 目；所述无菌瓶为灭菌处理后的玻璃瓶； 孵化温度为 30±2℃，孵化时间为 20-72 h； 所述灭菌水选自灭菌超纯水； 所述方式（a）、（e）中，摇床转速为 100~200 rpm； 所述灭菌盐水的浓度为 2.0%-3.5%，所述灭菌盐水虫卵混合液中，丰年虫卵的用量为 2.5~5.0 g/L。

2.根据权利要求 1 所述的无菌丰年虫的制作方法，其特征在于：所述无菌孵化方法选自 （a）、（d）、（e）方式中的任意一种。

3.根据权利要求 1 所述的无菌丰年虫的制作方法，其特征在于：采用次氯酸钠(NaClO) 溶液对丰年虫卵进行漂洗杀菌处理，然后用灭菌水清洗干净； 和/或，丰年虫卵漂洗杀菌处理时间为 3~10min。

4.根据权利要求1~3任一项所述的方法在制作无菌丰年虫以及在无菌鱼培育和毒理学检 验领域中的应用。

5.一种无菌鱼的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：采用权利要求 1~3 任一项所述 的方法制备无菌丰年虫，然后用于喂食幼鱼，培育得到无菌鱼； 2 喂食方法包括如下步骤：幼鱼在 7-10 dpf 喂食灭菌蛋黄，从 11-18 dpf 开始喂食灭菌 蛋黄和无菌丰年虫，每天喂食 1 次，每次可摄食 1~3 只丰年虫/每条鱼，根据生长发 育逐步增加喂食量，至幼鱼完成摄食丰年虫即可断掉蛋黄，全部喂食无菌丰年虫， 直至成鱼。

6.根据权利要求 5 所述的无菌鱼的培育方法，其特征在于：选取活跃游动的无菌丰年虫 制成无菌丰年虫悬液，用于喂食幼鱼。

7.根据权利要求 5 所述的无菌鱼的培育方法，其特征在于：所述鱼包括淡水鱼和海水鱼。