[发明专利]一种羟苯磺酸钙中遗传毒性杂质的定量测定方法

权利要求书

1.一种羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述杂质为2-磺酸基-1,4-苯醌与1,4-苯醌，采用液相色谱进行分离测定，供试品经过衍生化试剂进行衍生化，再加入溶剂配置成供试品溶液；所述的溶剂为10％～80％的乙腈水溶液，所述的衍生化试剂通过如下方法制备获得：取2,4-二硝基苯肼加入体积分数为80-90％的磷酸溶液0.4～0.6ml，再加入乙腈混匀，制得含2,4-二硝基苯肼浓度为0.1mg/ml～10mg/ml的溶液即为衍生化试剂。

2.一种羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述杂质为2-磺酸基-1,4-苯醌与1,4-苯醌，采用液相色谱进行分离测定，色谱条件如下：

色谱柱：封端的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；

检测波长为：300nm～400nm；

流速：0.8～1.2ml/min；

柱温：0℃～40℃；

流动相：以pH4.5±0.5的缓冲盐溶液-乙腈的混合溶液作为流动相，缓冲盐溶液与乙腈的体积比为(80:20)～(35:65)；

2-磺酸基-1,4-苯醌与1,4-苯醌对照品溶液：取2-磺酸基-1,4-苯醌与1,4-苯醌，加溶剂制备成二者的混合溶液，加入衍生化试剂1～10ml衍生化1h～24h后，加溶剂配制成0.1～0.2μg/ml的对照品溶液；

供试品溶液：取供试品，加入衍生化试剂1～10ml衍生化1h～24h后，加溶剂配制成0.03～0.05g/ml供试品溶液；

所述的溶剂为10％～80％的乙腈水溶液；优选的，所述的溶剂为20％～35％的乙腈水溶液，所述的衍生化试剂通过如下方法制备获得：取2,4-二硝基苯肼加入体积分数为80-90％的磷酸溶液0.4～0.6ml，再加入乙腈混匀，制得含2,4-二硝基苯肼浓度为0.1mg/ml～10mg/ml的溶液即为衍生化试剂。

3.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈色谱柱，规格4.6mm×250mm，5μm。

4.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述的流动相中的pH4.5±0.5的缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液或三乙胺缓冲溶液，优选为磷酸二氢铵缓冲溶液。

5.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，2,4-二硝基苯肼的摩尔量大于2-磺酸基-1,4-苯醌和1,4-苯醌摩尔总量的2倍，优选为2-磺酸基-1,4-苯醌和1,4-苯醌摩尔总量的2～5倍；优选的，衍生化5～6h，更优选的衍生化4.5～5.5h。

6.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述的流动相缓冲盐溶液与乙腈的体积比为(45～55)：(47.5～52.5)，优选为50:50。

7.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述的检测波长为378nm±5nm。

8.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述的流速为0.8～1.2ml/min。

9.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，所述的柱温为25℃±5℃。

10.根据权利要求2所述的羟苯磺酸钙中杂质的定量测定方法，其特征在于，取供试品溶液和对照品溶液各5μl～20μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按照外标法计算样品中2-磺酸基-1,4-苯醌和1,4-苯醌的量。