[发明专利]一种MGI平台转座酶双端标签文库的制备

说明书

本发明提供一种制备与非转座式双标签滚环测序文库兼容的转座式双标签滚环测序文库的方法，及其中使用的试剂，特别是一种寡核苷酸对。

技术领域

本发明涉及基因测序技术领域，尤其是一种转座酶文库的制备方法和二代测序方法。

背景技术

高通量测序技术(High-throughput sequencing technology)又称为第二代测序技术(Next-generationsequencing technology)，可简写为NGS，是指一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定的技术，准确度高，通量大。

常规二代测序文库构建的方法是通过物理或化学的方法将双链DNA片段化，末端修复、连接接头，经PCR扩增后纯化得到文库。Tn5转座酶是转座酶的一种，可以将繁琐的DNA片段化、末端修复和接头连接反应等步骤变为一步简单的酶促反应，广泛应用于二代测序文库构建。

目前二代高通量测序平台主要包括Illumina、Ion Torrent、MGI等，根据文库模板富集过程是否在测序仪上可以分为两类，一类是以Illumina和Ion Torrent为代表，其扩增过程都是在测序仪上采用指数型PCR扩增完成的，这种指数型扩增虽然效率高，但存在False SNP、False Indel、GC偏好性、标签跳跃等问题；另一类是MGI平台的滚环扩增，其扩增过程在测序仪外进行，这种扩增方法具有线性扩增、低扩增偏向性、零错误累积、低标签跳跃的特点。MGI测序平台作为国产测序平台代表之一，依靠其错误率低、通量大等优点被广泛应用。

现有技术构建的适用于MGI平台的转座酶文库，与MGI平台非转座酶文库混合测序时，在测序引物中存在串扰问题，无法混合测序，必须包run测序，可能带来测序灵活度下降、数据量浪费等问题，造成使用体验不佳。

发明概述

发明目的

本发明的目的是提供一种MGI平台转座酶双端标签(barcode)文库制备和测序的方法，解决现有MGI转座酶文库不能与MGI非转座酶文库混测的问题，更便捷高效。

发明内容

本申请的文库制备方法如下：

片段化步骤：包括采用Tn5转座子或Tn5转座子包埋的磁珠对待测DNA样本进行处理，通过一步处理，即可获得片段化、末端修复和接头连接的片段化DNA样本；

Tn5酶促反应终止步骤：包括通过磁珠纯化或加入终止反应液，终止Tn5酶促反应；

PCR扩增步骤：包括采用带有双端barcode的引物组，对Tn5酶促反应终止步骤的产物进行PCR扩增，获得双端barcode标记的待测DNA样本；

扩增产物纯化步骤：包括对PCR扩增产物进行纯化或分选，获得纯化产物，将其作为待测DNA样本的双链测序文库；

测序步骤：包括采用MGI测序平台对待测DNA文库进行测序，获得测序数据，对测序数据进行质控和分析。

有益效果

本申请的文库制备方法，采用Tn5转座酶进行双端barcode建库测序，流程简单快速，文库质量符合测序要求；相较于现有方法，可以与MGI平台非转座酶文库混合测序，测序质量符合需求，节省时间和成本。

序列表

110 南京诺唯赞生物科技股份有限公司

120 一种MGI平台转座酶双端标签文库的制备

160 56

170 SIPOSequenceListing 1.0

210 1

211 19

212 DNA

213 人工序列(Artificial Sequence)