[发明专利]一种麋鹿角特征肽段及其检测方法

权利要求书

1.一种麋鹿角特征肽段，其特征在于，所述的特征肽段为：

特征肽段1：Gly-Ser-Hyp-Gly-Gly-Hyp-Gly-Ala-Ala-Gly-Phe-Hyp-Gly-Gly-Arg；

特征肽段2：Gly-Leu-Ala-Gly-Pro-Hyp-Gly-Met-Hyp-Gly-Ala-Arg；

特征肽段3：Gly-Leu-Thr-Gly-Pro-Ile-Gly-Pro-Hyp-Gly-Pro-Ala-Gly-Ala-Hyp-Gly-Asp-Hyl；

内参肽段：Gly-Glu-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Arg。

2.一种麋鹿角特征肽段的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求1所述的3个麋鹿角特征肽段及内参肽段配成对照品溶液；

(2)将待检测角类动物药样品提取蛋白质，然后用蛋白酶进行酶切后，将酶解液和步骤(1)3个麋鹿角特征肽段及内参肽段对照品溶液分别注入液质联用仪，以麋鹿角特征肽段为对照，采用多反应监测模式，选择的MRM条件为：特征肽段1：m/z 645.3双电荷→573.3，DP＝80.00，CE＝35.00、特征肽段2：m/z 556.8双电荷→407.8，DP＝78.51，CE＝29.36、特征肽段3：m/z 804.40双电荷→448.2，DP＝144.01，CE＝37.80、内参肽段：m/z 781.4双电荷→556.3，DP＝91.00，CE＝41.40，进行检测，根据检测出上述离子情况对不同的角类动物药样品进行区分。

3.根据权利要求2所述的麋鹿角特征肽段的检测方法，其特征在于，如果检测出肽段1离子对，且离子的保留时间与麋鹿角特征肽段1对照品一致，其子离子与对照品的子离子一致，则所述待检测样品中含有麋鹿角成分；麋鹿角、马鹿角及梅花鹿角均可检测特征肽段2与特征肽段3，其中，麋鹿角A_特征肽-2/A_内参肽的值不低于0.182，马鹿角A_特征肽-2/A_内参肽的值不高于0.044，梅花鹿角A_特征肽-2/A_内参肽的值不高于0.047；

麋鹿角A_特征肽-3/A_内参肽的值不低于2.038，马鹿角A_特征肽-3/A_内参肽的值不高于0.497，梅花鹿角A_特征肽-3/A_内参肽的值不高于0.555。

4.根据权利要求2所述的麋鹿角特征肽段的检测方法，其特征在于，角类动物药样品蛋白质提取方法为：取待检测角类动物药样品适量，加10倍水，回流提取6小时，重复3次，合并滤液后浓缩，冷冻干燥，得麋鹿角提取物。

5.根据权利要求2所述的麋鹿角特征肽段的检测方法，其特征在于，所述的酶切方法，包括使用胰蛋白酶、胃蛋白酶、弹性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶或复合酶进行水浴酶切或超声酶切。

6.根据权利要求2所述的麋鹿角特征肽段的检测方法，其特征在于，角类动物药样品蛋白质提取方法为：取待检测麋鹿角样品20mg，加入1ml蛋白裂解液，匀浆3次，离心，取上清液，测定蛋白含量，取1000μg蛋白，加入冷丙酮溶液，充分混匀后，冷藏，沉淀过夜；取丙酮沉淀样品离心后，弃去上清，用冷丙酮洗涤沉淀一次，挥干沉淀，加入尿素溶液复溶，充分振摇，待沉淀完全溶解后加入Tris-HCl缓冲液，在各个角类样品中分别加入胰蛋白酶，恒温水浴孵育，即得。