[发明专利]胰岛细胞及其分离方法在审
| 申请号： | 202210489918.1 | 申请日： | 2022-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN114672452A | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 李晓牧;王宝敏;杨玉梅 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属中山医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 范艳静 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胰岛 细胞 及其 分离 方法 | ||
1.一种胰岛细胞的分离方法，该方法为非疾病的诊断和治疗目的的方法，其特征在于：其包括如下步骤：
(1)、将离体的胰腺组织放入磷酸缓冲盐溶液中，得到处理过的胰腺组织；
(2)、将胶原酶溶液多部位灌注步骤(1)中处理过的胰腺组织内，使其充分膨胀，得到肿胀的胰腺组织；
(3)、将所述肿胀的胰腺组织放入含胶原酶溶液的离心管中，振荡消化数次，消化的时间为8-10min，加入G-solution缓冲液终止消化，得到消化液；
(4)、将所述消化液离心，弃上清，加入G-solution缓冲液重悬，得到重悬液；
(5)、用G-solution缓冲液提前预湿不锈钢筛，将所述重悬液用预湿的不锈钢筛过滤，得到滤液；
(6)、滤液经过数次重悬，得到糜状消化终产物，过滤，得到沉淀物；
(7)、将所述沉淀物接种至细胞培养基中，并收集胰岛细胞。
2.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述胶原酶溶液的配制过程为：胶原酶P和HBSS缓冲液混合得到，其中，HBSS缓冲液由重蒸水、HBSS和碳酸氢钠混合得到。
3.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述充分膨胀后的体积为原体积的2-3倍。
4.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(3)中，所述振荡的时间为30-60s。
5.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(3)中，所述G-solution缓冲液的配制过程为：含0.25％牛血清白蛋白的HBSS缓冲液和重蒸水混合得到，其中，HBSS缓冲液由重蒸水、HBSS和碳酸氢钠混合得到。
6.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(4)中，所述离心的转速为400-600rpm，时间为4-6min。
7.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(5)中，所述不锈钢筛的孔径为400-420μm。
8.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(6)中，所述过滤时，细胞滤器的孔径为60-70μm。
9.根据权利要求1所述的胰岛细胞的分离方法，其特征在于：步骤(7)中，所述细胞培养基的组分为：RPMI-1640培养基、胎牛血清和双抗。
10.一种胰岛细胞，其特征在于：其由权利要求1-9任一项所述的分离方法得到。
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