[发明专利]一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法

权利要求书

1.一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，合成以RBD为载体靶向递送shRNA的化合物，包括分别合成靶向新冠病毒共同靶标的shRNA和以ACE2为受体的冠状病毒RBD，然后将合成的RBD分别连接到合成的shRNA的正反义链上，构成以RBD为载体向ACE2靶向递送shRNA的RBD-shRNA-RBD化合物，进而以脂质体修饰，使所合成的化合物能使各组分相互增效，其中因RBD的靶向递送而使shRNA能发挥针对ACE2表达细胞的特异性作用，因RBD又是蛋白抗原所以被shRNA连接而构成的2个RBD分子因改变了分子结构和分子量而使其抗原性更强，被RBD连接的shRNA因增加了胞膜通透性和抗核酸酶稳定性而易进入ACE2表达细胞的胞浆，shRNA和脂质体又是增强RBD疫苗效果的免疫佐剂。

2.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述靶向新冠病毒共同靶标是指用于合成shRNA的siRNA选自数据库记载的各种致病性冠状病毒及其变异毒株的共有保守基因，使合成的shRNA靶向干扰所述共有保守基因，从而起广谱抗新冠病毒变异毒株的作用；所述共有保守基因包括但不限于超保守基因、保守基因和/或由保守微卫星拼接而成的基因序列。

3.根据权利要求1、2所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述合成shRNA包括但不限于首先合成2条互补的约21-25nt的寡核苷酸多肽siRNA以及合成起间隔作用的碱基序列，然后将所合成的siRNA和所合成的起间隔作用的碱基序列连接成由所述碱基序列间隔成中间为loop环的小发夹shRNA双链，继之在小发夹shRNA双链的每条单链上各连接RBD或其多肽。

4.根据权利要求1、3所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列包括但不限于SEQ ID NO.1～58。

5.根据权利要求1、4所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列包括但不限于新型冠状病毒共有RNAi序列SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7～10、SEQ ID NO.16～18、SEQ ID NO.20～22、SEQ ID NO.30～32、SEQ ID NO.41～58。

6.根据权利要求1、5所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述合成shRNA的siRNA序列进一步优选为靶向冠状病毒N基因的SEQ ID NO.16-18和SEQ ID NO.49-51，靶向冠状病毒ORF1ab基因的SEQ ID NO.20-22和SEQ ID NO.52-54，以及靶向冠状病毒S基因的SEQ ID NO.30-32和SEQ ID NO.56-58；所述合成shRNA的siRNA序列更进一步优选为靶向N基因的SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.49，靶向ORF1ab基因的SEQ IDNO.21和SEQ ID NO.52，靶向S基因的SEQ ID NO.30。

7.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述合成RBD包括但不限于合成S蛋白的第319-510位氨基酸序列、能与ACE2结合但不易发生变异的N439、V483和Q493位点的保守氨基酸序列和经密码子优化的氨基酸序列。

8.根据权利要求1所述的一种以RBD靶向递送shRNA的nCOVsiRNA药物制备方法，其特征在于，所述连接或合成包括但不限于将RBD的糖基化N氨基与shRNA的反义链3'末端、正义链5'末端或3'末端进行连接，并包括但不限于以二硫键、磷酸二酯键、二硫代磷酸脂键、硫醚键、肟键、酰胺键、马来酰亚胺-巯基键的化学偶联或共价偶联进行连接。