[发明专利]一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法在审
| 申请号： | 202210492051.5 | 申请日： | 2022-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN114891914A | 公开（公告）日： | 2022-08-12 |
| 发明（设计）人： | 曹际娟;尹新颖;徐艺玲;刘奕銮;张一;陆忠婷;闫爽;马超 | 申请（专利权）人： | 大连民族大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;G01N33/68 |
| 代理公司： | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙) 21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116600 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检疫 鉴定 黄瓜 斑驳 花叶 病毒 种子 基体 标准 样品 制备 方法 | ||
1.一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，具体包括以下步骤：
(1)种子批中感染的CGMMV野生株鉴定：种子批中感染的CGMMV为西葫芦种子携带的野生株，选用经鉴定为CGMMV阳性的野生株；
(2)确定原料重量：确定需要制备的检疫鉴定种子及其制品植物病害的CGMMV种子粉基体标准样品的原料重量；
(3)低温研磨：将步骤(2)混杂有感染CGMMV的一批种子，放置于超低温冰箱中充分冷冻，采用粉碎机进行粉碎，得到种子粉；
(4)筛分处理：将步骤(3)粉碎好的混杂感染CGMMV种子粉筛分，过金属筛得到颗粒均匀的种子微粉；
(5)搅拌混匀：步骤(4)过筛后的混杂感染CGMMV种子微粉装于无菌包装袋中置于干粉混匀器上摇晃混匀，得到均匀性符合国家标准样品性能要求的标准样品；
(6)分装储存及性能评价：将步骤(5)制备的CGMMV种子基体标准样品分装于样品瓶，采用三级密封装置封存，放置于低温条件长期储存，随机抽取样品进行均匀性、稳定性检验评价；
(7)溯源性描述：将步骤(1)-(6)处理后的种子粉基体标准样品进行CGMMV野生株经靶标基因序列测序及序列同源性比对分析；
(8)联合定值：将步骤(1)-(6)处理后的种子粉基体标准样品进行随机抽样，由8家实验室联合确定本标准样品的特性标准值。
2.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(2)中所述原料重量满足每批次种子粉基体标准样品制备至少300瓶，至少1g/瓶。
3.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(3)中放置于-80℃超低温冰箱中充分冷冻至少24小时。
4.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(4)中所述金属筛的目数至少为50目。
5.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(5)中摇晃混匀的时间至少为48小时。
6.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(6)中所述的三级密封装置由硅胶盖、铝箔盖、塑胶盖组成。
7.如权利要求1所述的一种用于检疫鉴定黄瓜绿斑驳花叶病毒的种子粉基体标准样品制备方法，其特征是，步骤(6)中所述的低温条件为-20℃以下。
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