[发明专利]含CpG ODN的吸附型疫苗的解吸附组合物及其应用

权利要求书

1.一种体外检测含CpG ODN佐剂的吸附型疫苗抗原效力的方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：配制解吸附试剂；其中，所述解吸附试剂是磷酸钾盐、M199培养基、氯化镁和Triton-100的水溶液，所述解吸附试剂中磷酸钾盐的终摩尔浓度为0.6M-2.0M，所述氯化镁最终摩尔浓度为0.1M-0.8M，M199培养基的终体积浓度为10%-60%；所述Triton-100在解吸附试剂中的最终体积浓度为0.1%-3%；

步骤2：CpG ODN解吸附：将参考品及样品分别与解吸附试剂以体积比1:（1-5）混合，于4℃-28℃孵育20-120min，孵育过程中每10-20min颠倒混匀一次；

将获得的混合物离心，离心程序为2000-7000rpm，离心时间为10min-60min，离心温度为4℃-28℃，得到上清液；

步骤3：解吸附后体外抗原效力检测：将步骤2中的上清液稀释后，使用双抗体夹心ELISA法检测样品OD值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述解吸附试剂中，磷酸钾盐的终摩尔浓度为0.6M-1.2M，氯化镁最终摩尔浓度为0.1M-0.4M，M199培养基的终体积浓度为20%-50%；Triton-100在解吸附试剂中的最终体积浓度为0.5%-1%。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，双抗体夹心ELISA法检测样品OD值的步骤包括：

步骤4：将特异性针对待检抗原的第一抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中加入标准品及待测样品，其中待测抗原与固相载体上的第一抗体结合；

步骤5：再加入与抗原特异性结合的检测抗体，形成双抗体夹心的结构，所述双抗体夹心的结构为：包被固相载体的第一抗体-疫苗抗原-检测抗体；

步骤6：使用HRP标记的第二抗体与检测抗体特异性结合，形成检测复合物，所述检测复合物的结构为：包被固相载体的第一抗体-疫苗抗原-检测抗体-HRP标记的第二抗体；

步骤7：加入显色底物TMB，与步骤6得到的检测复合物反应后显色；

步骤8：通过酶标仪测定吸光值；用统计学软件分析参考品与样品结果，用双平行线法计算样品体外相对效力。